【交流】晒晒蛋白胶(PAGE)染色液和脱色液的配方
发现蛋白胶染色液和脱色液的配方有很多。
不知道各位用的是什么样子,还有胶的处理方法
大家拿出来讨论下。
首先,我把我们实验室的记下来。
染色液:
考马斯亮蓝R250 1.2g/L ; 甲醇:水:乙酸 (5:4:1 或 4.5:4.5:1)
脱色液:
除不加考马斯亮蓝R250 其他一样。
染色:微波高火15-20S 再染1 h 或 常温 3h-过夜
回收染料适当延长时间
脱色:脱到能看清
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我们用的是
染色液:
考马斯亮蓝R250 ; 乙醇:水:乙酸 脱色液:
除不加考马斯亮蓝R250 其他一样。
染色: 常温 2h
脱色:脱一整夜
染色液比例呢 嘿嘿
据《蛋白质技术手册》2001,科学出版社
考马斯亮蓝染液,1L:
R-250 1.0g
甲醇 450ml
蒸馏水 450ml
冰醋酸 100ml
脱色液 1L:
甲醇 100ml
冰醋酸 100ml
蒸馏水 800ml
染色常温 2h
90℃ 30min
脱色常温过夜
90℃ 2h
这个教科书上的配方(脱色液)在实际操作中肯定是不行的,甲醇和冰醋酸浓度太低会导致根本脱不了色,或者脱色太过漫长,
配方
染色液:考马斯亮蓝R-250 2.5g/L 甲醇:水:冰乙酸=4.5:4.5:1
脱色液:同上,不加考马斯亮蓝
染色:常温3h,
脱色:半小时换一次脱色液,3次后过夜脱色。
由于甲醇和冰乙酸浓度较高,胶会出现缩小,拍照时以卷曲,故拍照前用稀释后的脱色液(稀释30倍)振荡1h后拍照
,
刚脱色的胶确实很皱 没法拍照
脱色后的胶一般在水里泡上一天后才能拍照
泡水后胶都会变大很多
但是你的方法也需要过夜啊。我的方法脱色效果也很好,而且省试剂。
我用的脱色液是水:365ml,甲醇:35ml,冰醋酸100ml。