质粒电泳中超螺旋带的判定
我跑的是pBR322,想用其来检测一种酶的活性,需要得到这个质粒的比较清晰的超螺旋带,然后加上一种酶看其超螺旋带是否消失?问题是跑了很多次,有时候出现两条带,有时候三条带。两条带的时候最前面哪一条是不是超螺旋带呢?三条带的时候,最前面的条带亮度比较弱,是不是超螺旋带,还是紧跟其后的那条带是超螺旋带?还有质粒在4度保存是不是降解的很快。因为每次用几微升,用量很少,放在4度待了几天,结果刚开始跑还是一条带,后来两条,再后来成了三条,这是不是质粒降解的缘故?还有我如果放在负20度冰箱,每次用的时候融化,这样质粒会不会降解的比较快?还是在4度降解的快?这两种方法哪个降解速度会慢一些?请各位虫友指教!谢谢!
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一般都放在-20度保存,拿出来用也没有什么问题的,质粒讲解没那么快的,
你的酶是用来切dna的吗?
听说用低浓度的抗生素培养液,可以增加紧密型质粒的比率
是解螺旋用的,不用于切DNA