求助关于pet28a的宿主问题
实验室现有JM109，DH5a,B21(DE3),TOP10等4种感受态细胞。按理说最好是用B21（DE3），但是其转化效果最差。推测酶切和连接都没有问题但就是长不出克隆。转化空载时用1ul的载体转100ul感受态可以长出50个左右的克隆。但连接产物就是不行。
想请教诸位的是，其他的几种感受态有哪一种可以比较近似地替代B21（DE3)？
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京公网安备 11010802022153号
BL21是表达宿主,所以最好用这个
其他的都是用来克隆的
通常我们是连接后转DH5a这些菌株的感受态细胞，然后鉴定提质粒。用提取的质粒转BL21，做细菌表达。
这样效率高很多。
请教 pinene3862，您用pET28a转过DH5a？效果如何？
DH5a是克隆用的菌，拿pET28a转应该没问题的。我做过pET22b、pET30a还有pET41a，效果都很好的。pinene3862的方法我们实验室也一直在用，效率很高，
我的实验也是先克隆到JM109,然后在亚克隆到BL21的
因为pET载体的拷贝数比较低
不容易直接克隆到表达宿主中
谢谢wolfebst 。收获不少
我也遇到一样的情况，重组质粒在BL21中怎么都转化不出。谢谢指教，我也回去试试。