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荧光问题

作者 中原小哥
来源: 小木虫 550 11 举报帖子
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做荧光分析时,为确定荧光最大激发波长和发射波长,是不是常先把发射波长设定为0,然后扫描激发波长,得到若干激发峰,然后再依次用得到的不同激发峰的波长为激发光,扫描发射波长,得到那个不随激发光波长而变化的发射峰为最大发射波长,然后依此最大发射峰确定,扫描激发光谱,得到最大激发光?如果如上,为什么一开始要把发射波长设为0呢?请指教,谢谢 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • lulinsmann

    lz搞错了,把发射波长设定为0是不可能获得激发谱(即你所说的扫描激发波长)的。
    首先确定一下定义:PL谱和PLE谱
    PL谱,即光致发光谱,是选定一个激发波长,然后记录在该激发波长下,荧光强度随波长的变化(即lz所说的扫描发射波长,此时的横坐标是发射波长)
    PLE谱,即光致发光激发谱,是将你要探测的波长选定,然后改变激发波长,记录在不同激发波长下,所探测波长的荧光强度变化(此时的横坐标是激发波长)
    所以,偶认为正确的测试荧光光谱的顺序是:
    1)选定一个激发波长(通常选择常用的激发波长——从同行文献中找到,如果实在不知道,我建议先选取较短的波长——光子能量更高,样品受激发的可能性更大),获得一张PL谱,此时可以看到发光峰,获得其波长;
    2)选定该发光峰波长,做PLE谱,也可能获得一个峰,或如你所说若干峰,获得这些波长;
    3)选用PLE中的波长,对样品再次进行测试PL谱
    这样,你就达到了目的:确定荧光最大激发波长和发射波长,

  • dfazx

    我们不是那样做的,我们一般是先做一个紫外吸收,大体确定以下激发波长,然后以最大吸收的波长为激发,在荧光仪上扫描,先扫发射,在固定发射波长时再回来扫激发

  • lulinsmann

    嗯,楼上所说也是一种办法,但有两点局限性:
    1)设备局限:除了荧光分光光度计外,还需要一台紫外-可见分光光度计
    2)样品局限:做紫外吸收对于液体样品比较容易实现,而对固体样品的测试则比较麻烦

  • puyu

    先选一个激发波长测发光峰位还是先固定监测波长找激发波长,我觉得是根据不同的样品而不同的,一般来说对于自己的样品的发光性能了解的不多的话,两种都要尝试一下的。
    比如有的物质,发射峰位比较固定,文献容易查的,那么就可以固定监测波长,测激发光谱,可能存在着基质与发光离子之间的传能,所以最有效的激发波长会因为基质的不同而不同。
    令一种情况就相反,比如发光离子对环境比较敏感,那么可能需要先定一个激发波长了,这种情况应该比较麻烦,不过反复测都可以找出来的

  • wangshuang533

    其实也可以做一下三维荧光。先扫一下缓冲的三维荧光光谱,然后在加入样品扫一下三维,这样两张图对比一下就出来了大致的激发和发射波长了。要想精确还是要像二楼的那样说得先确定激发扫发射,在确定发射扫激发。

  • opq691

    一般照楼上的试几个数据就出来 了

  • CE-CL

    我们一般是按照5楼的方法来的

    实验室里一般情况下紫外仪器要比荧光仪器更常见

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