正在做文库质粒转化,但是转化效率不高,请高手指教
利用T4连接酶连接后,文库质粒大小约8.3kb——13kb,转化感受态大肠肝菌DH5a(自制的感受态细胞)进行文库质粒的扩增,但是每次转化(近40次)的只能得到约100个克隆,偶然一次达到了1200多个克隆
我想要让每次转化都最好达到至少1000个克隆以上
那么,我想请教大家如何通过改进方法使文库质粒转化的效率提高?
谢谢大家!
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利用T4连接酶连接后,文库质粒大小约8.3kb——13kb,转化感受态大肠肝菌DH5a(自制的感受态细胞)进行文库质粒的扩增,但是每次转化(近40次)的只能得到约100个克隆,偶然一次达到了1200多个克隆
我想要让每次转化都最好达到至少1000个克隆以上
那么,我想请教大家如何通过改进方法使文库质粒转化的效率提高?
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我也在做,呵呵,经常交流啊。
你测过你的感受态的转化效率么?能到10的几次幂?
电击转化还是氯化钙转化?
转化的时候用的体系是100 微升么?
加了?%的连接产物进去,
建议你用电击感受态 做好了的话 会有很多的斑
使用电击转化,一次的连接产物分若干个电击杯来电转,
合起来的转化产物可以达到10的6次方以上的转化克隆。
用电转化,可以考虑买商用的电转化细胞,效率会很高。
我转化的产物质需要达到10的四次方就可以了
用的是氯化钙法
请问有什么技巧,使用这种方法的转化效率提高呢?
这么大片段得文库建成很不容易,所以试剂、感受态等都要用好的
感受态最好用商品电转化感受态
制作超级感受态,可以达到10的9此方,好的可以到10次方!!!!