请教各位虫友：目的基因克隆进入表达载体是否在上游引物上要加atg?
我最近正在做一段目的基因克隆进入载体pet28a的实验。
设计引物时选择的酶切位点，上游是BamHI,下游是XhoI，我在上游引物BamHI酶切位点后面没有添加atg，因为考虑到pet28a本身带有翻译起始密码子atg，想请教各位我的想法是否正确？在引物上没有添加atg应该不会影响翻译和表达吧？
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本人现在也在作表达，和你的思路差不多，但是觉得还是加ATG比较好，小心驶的万年船！
这个加不加ATG是无所谓的，BamHI位点前是有ATG密码子的，具体见28a的质粒图谱。
提醒一下：
看你的蛋白质性质，连接到载体上前面最好不要带多余的氨基酸，因为有的蛋白翻译后需要经过修饰才有活性的，如切去ATG编码的第一个甲硫氨酸（MIF家族），若前面带了很多氨基酸，则很难修饰，很可能没有活性，