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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lrs088

铜虫 (小有名气)

[交流] 请教各位虫友:目的基因克隆进入表达载体是否在上游引物上要加atg?

我最近正在做一段目的基因克隆进入载体pet28a的实验。
设计引物时选择的酶切位点,上游是BamHI,下游是XhoI,我在上游引物BamHI酶切位点后面没有添加atg,因为考虑到pet28a本身带有翻译起始密码子atg,想请教各位我的想法是否正确?在引物上没有添加atg应该不会影响翻译和表达吧?
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ypan

木虫 (著名写手)


asr(金币+1,VIP+0):谢谢交流宝贵经验.:P
本人现在也在作表达,和你的思路差不多,但是觉得还是加ATG比较好,小心驶的万年船!
2楼2007-11-24 12:47:38
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xthua

木虫 (小有名气)

★ ★
asr(金币+2,VIP+0):谢谢交流.
这个加不加ATG是无所谓的,BamHI位点前是有ATG密码子的,具体见28a的质粒图谱。
3楼2007-11-24 18:16:51
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clocksoar

木虫 (正式写手)

★ ★
asr(金币+2,VIP+0):谢谢交流.
提醒一下:
    看你的蛋白质性质,连接到载体上前面最好不要带多余的氨基酸,因为有的蛋白翻译后需要经过修饰才有活性的,如切去ATG编码的第一个甲硫氨酸(MIF家族),若前面带了很多氨基酸,则很难修饰,很可能没有活性。
4楼2007-11-24 20:00:11
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