大质粒转化中有什么提高转化率的方法吗？急！！！
请教大家，比较大的酶连产物（12kb）在转化到大肠杆菌中的时候有什么提高转化效率的方法吗？我们做的感受态大肠杆菌就是用分子克隆中的CaCl2方法，转化的大体步骤如下：
1. 酶连产物加入到200ul感受态细胞悬液中，flicking slightly
2. 冰上30分钟
3. 42度热激90秒
4. 冰上5分钟immediately
5. 超净台中加入1ml LB
6. 37度静置1h
7. 5000rpm, RT, 5min
8. 倾出大部分上清液，剩余大约200ul
9. plating
10. 37度倒置培养12-16小时
11. 挑取克隆
但是转化后总是没有克隆，用这种方法做的时候，其他比较小的酶连产物（<9kb）的转化结果都挺成功的，因此就觉得症结所在就是酶连产物太大，还没有找到合适的解决方法，拖了挺长时间了，请大家多多帮忙！！谢谢！！
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今日热帖
京公网安备 11010802022153号
制感细胞的时候加点镁离子试试~
hotdunk:
多谢关心！
能说的详细一点吗？
比如在制备感受态的那一步？加多少量镁离子？镁离子是以什么形式加进去的呢？MgCl2行吗？还有就是加镁离子能提高感受态的转化率的原理是什么呢？恳请前辈指点！十分感谢！！
20mM MgCl2吧 以前好像在那儿的文献上看过 具体不记得了 不过我自己的实践证明有镁离子的感细胞的确比CaCl2单制出来的感细胞转化效率高~ 可以自己摸索一下，我没有转过那么大的片断，最大也就8、9M，所以不好说，呵呵……
谢谢！
值得高兴的是今天终于转化出来了，菌液 PCR的结果也是对的，真是高兴坏了！哈哈！
只是，以后光这么重复也不是办法啊！下次试试上面的方法。具体的方法我先查一下吧，或者johnsooh那里有具体的实验方法？能否共享？多谢！
我的信箱是：hugang2004_2000@yahoo.com.cn
十分感谢大家，祝大家节日快乐，
可以尝试用电转化啊
电转化的转化效率还是相当的高的！
对啊，可以用electroporation
感谢gandalf886和沙砾！
因为电转化中使用的cpcell 的制作方法要求比较高，实验室里也还没有建立起来这种方法，所以也就还没用。能否告知电转化cpcell的详细制作方法及转化步骤？下次可以用用看看。呵呵，谢谢了！