利用IPTG去诱导PET重组载体(已经连上目的基因)在BL21中进行表达,一般诱导温度选择多少?怎样来选择?请教各位虫虫 返回小木虫查看更多
BL21的表达外源蛋白的诱导温度一般在37度,也就是大肠杆菌的最适生长温度,如果选择合适的诱导温度,主要是根军蛋白质的表达的多少来衡量,一般选择最适合蛋白质表达的温度也就是最佳的诱导温度。
37度比较常见吧,如果要纯化目的蛋白,而37度诱导时形成了包涵体,温度调低诱导可能会促成可溶性蛋白的形成。蛋白不同,最适表达的温度也有差异,可以设几个温度梯度表达,这样对比起来可能会更好地筛选,
我们有时候采用28度进行诱导,感觉表达量高一些。 这些条件,包括IPTG的用量都是要进行摸索的。
每个蛋白不同,很难有通用的。 建议室温和37度,做时间曲线(0,1,3,5,过夜),ITPG用0.2mM. 电泳检测。
如果要大量可溶蛋白,应该做一个温度和时间梯度,如20,25,28,37等,诱导时间3h,5h,7h和过夜等,然后跑电泳看哪个条件下表达量大,一般低温过夜效果较好。
BL21的表达外源蛋白的诱导温度一般在37度,也就是大肠杆菌的最适生长温度,如果选择合适的诱导温度,主要是根军蛋白质的表达的多少来衡量,一般选择最适合蛋白质表达的温度也就是最佳的诱导温度。
37度比较常见吧,如果要纯化目的蛋白,而37度诱导时形成了包涵体,温度调低诱导可能会促成可溶性蛋白的形成。蛋白不同,最适表达的温度也有差异,可以设几个温度梯度表达,这样对比起来可能会更好地筛选,
我们有时候采用28度进行诱导,感觉表达量高一些。
这些条件,包括IPTG的用量都是要进行摸索的。
每个蛋白不同,很难有通用的。
建议室温和37度,做时间曲线(0,1,3,5,过夜),ITPG用0.2mM.
电泳检测。
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如果要大量可溶蛋白,应该做一个温度和时间梯度,如20,25,28,37等,诱导时间3h,5h,7h和过夜等,然后跑电泳看哪个条件下表达量大,一般低温过夜效果较好。