[求助]PSA培养基灭菌后出现絮状沉淀的原因是什么?
请教大家一个问题:
这两天小妹我配制培养真菌的斜面培养基,用的是PSA培养基,配方如下:土豆200g,蔗糖20g,琼脂20g,水1000ml。我试验中是严格按照此配方配制的,但是一旦用高压灭菌锅灭菌后就会出现絮状沉淀,我估计这个絮状沉淀是由于蛋白质变性产生的。想请教大侠们,这究竟是什么原因呢?我百思不得其解!在此,我先谢谢各位了!
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PDA培养基(马铃薯葡萄糖培养基) 马铃薯(去皮)200 g 、葡萄糖20 g、琼脂15~20g、蒸馏水1000 ml ,自然pH。
在PDA培养基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖,这样配制的培养基也称为PSA培养基。
(1) 称量 称量去皮马铃薯200 g,葡萄糖20 g,琼脂15~20 g。
提示:琼脂加入的量取决于琼脂的质量,质量好的15 g就够了,质量差的应适当增加。另外,在夏天气温较高时,适当增加用量。
(2) 将马铃薯切成小块,放入锅中,加水1000 ml,煮沸30 min。用纱布滤去马铃薯残渣。
(3) 将马铃薯滤液放回锅中,加入琼脂,加热熔化。
提示:在琼脂熔化的过程中,需要用玻璃棒不断搅拌,并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。
(4) 加入葡萄糖 葡萄糖溶解后,加入适量的水以补充加热过程中损失的水分,定容至1000 ml。
提示:通常在制作培养基的锅内用红蓝铅笔标记出不同体积的刻度,如1 000 ml、2000 ml等,在定容时直接将水加至已标记的刻度即可。
(5) 分装 根据不同的实验目的,可将配制的培养基分装于试管内或三角瓶内。分装试管,其量为管高的1/5,灭菌后制成斜面。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。
(6) 加塞 在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脱脂的经弹松的棉花,棉塞可过滤空气,防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发,故在植物病理学研究工作中普遍使用。
正确的棉塞是形状、划、、松紧与管口或瓶口完全适合,过紧时妨碍空气流通,操作不便;过松则达不到滤菌的目的,且棉塞过小往往容易掉进试管内。正确的棉塞头较大,约有1/3在外,2/3在试管内。分装过程中注意不要使培养基沾染在管(瓶)口上以免浸湿棉塞,引起污染。
(7) 包扎 加塞后,将试管用线绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等。
(8) 灭菌 将上述培养基以0.1MPa,121℃,高压蒸气灭菌20 min。
(9) 搁置斜面 将灭菌的试管培养基竖置冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
培养基经灭菌后,必须放在37℃温箱培养24h,无菌生长者方可使用。
PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基,一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时,可用l mol/L NaOH或l mol/L HCl溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCI溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分,
是土豆液没有过滤干净或者是琼脂里的杂质不溶物
谢谢以上两位的帮助!
我保证我的土豆是滤干净了的,或许是琼脂的问题吧!