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ぉ雨柯ぉ

金虫 (正式写手)

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[交流] [求助]PSA培养基灭菌后出现絮状沉淀的原因是什么？

请教大家一个问题：
这两天小妹我配制培养真菌的斜面培养基，用的是PSA培养基，配方如下：土豆200g，蔗糖20g，琼脂20g，水1000ml。我试验中是严格按照此配方配制的，但是一旦用高压灭菌锅灭菌后就会出现絮状沉淀，我估计这个絮状沉淀是由于蛋白质变性产生的。想请教大侠们，这究竟是什么原因呢？我百思不得其解！在此，我先谢谢各位了！

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世界上唯一不变的就是改变~~

1楼 2007-03-12 21:57:39

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wwwkkk83

木虫 (著名写手)

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★
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PDA培养基(马铃薯葡萄糖培养基)  马铃薯（去皮）200 g 、葡萄糖20 g、琼脂15～20g、蒸馏水1000 ml ，自然pH。

在PDA培养基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖，这样配制的培养基也称为PSA培养基。

(1) 称量  称量去皮马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂15～20 g。

提示：琼脂加入的量取决于琼脂的质量，质量好的15 g就够了，质量差的应适当增加。另外，在夏天气温较高时，适当增加用量。

(2) 将马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000 ml，煮沸30 min。用纱布滤去马铃薯残渣。

(3) 将马铃薯滤液放回锅中，加入琼脂，加热熔化。

提示：在琼脂熔化的过程中，需要用玻璃棒不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。

(4) 加入葡萄糖  葡萄糖溶解后，加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容至1000 ml。

提示：通常在制作培养基的锅内用红蓝铅笔标记出不同体积的刻度，如1 000 ml、2000 ml等，在定容时直接将水加至已标记的刻度即可。

(5) 分装  根据不同的实验目的，可将配制的培养基分装于试管内或三角瓶内。分装试管，其量为管高的1／5，灭菌后制成斜面。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。

(6) 加塞  在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脱脂的经弹松的棉花，棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，故在植物病理学研究工作中普遍使用。

正确的棉塞是形状、划、、松紧与管口或瓶口完全适合，过紧时妨碍空气流通，操作不便；过松则达不到滤菌的目的，且棉塞过小往往容易掉进试管内。正确的棉塞头较大，约有1／3在外，2／3在试管内。分装过程中注意不要使培养基沾染在管(瓶)口上以免浸湿棉塞，引起污染。

(7) 包扎  加塞后，将试管用线绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等。

(8) 灭菌  将上述培养基以0.1MPa，121℃，高压蒸气灭菌20 min。

(9) 搁置斜面  将灭菌的试管培养基竖置冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

培养基经灭菌后，必须放在37℃温箱培养24h，无菌生长者方可使用。

PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用l mol／L NaOH或l mol／L HCl溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。