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分类 共搜索到 71 个相关话题(最多显示前5000个) 作者 最后发表
分子生物 TA克隆连接不上
pcr用的Takara的LAtaq酶，连接用的是promega的PGEM?TEasyVector，涂完板最后长的白点很少，最后菌液pcr也p不出条带。做了一个多月了，都涂了两百个板，好不容易出了几个还是假阳，求大佬...
 锦墨暮秋函 2021-04-22 10:16
分子生物 克隆某未知基因片段，高保真酶仍然遇到突变并改变氨基酸，就问...
设计引物扩增长度大约1500bp，共2个片段，从cDNA文库中扩增，一开始用LATaq，后来在某合作者（PI）建议下用高保真酶又做了一次。高保真酶是NEB的Q5高保真酶（从未开封但在负20度放置了3年）...
 huajiachicat 2020-03-10 11:51
硕博家园 测序总是很多错配
本人研一刚做分子生物学实验的小透明一枚。最近做实验扩基因送测序...我用的是LATaq酶扩的，因为基因表达量比较低，我设置的循环数是35或者40.送了五次测序了。想向大神求助，是哪里出了问题？
 谭坑坑D 2018-06-17 01:28
分子生物 PCR总是p不出来啊，大神们求助
PCR总是p不出来，图中是体系跟程序，有时候配了4管一模一样的，只有一管有目的片段，后来再p一管也p不出来，稀释了模版十倍，20倍，也没用，酶lataq.primerstar都试过，摸过梯度，现在...
 熙源羊羊羊 2017-04-17 08:55
分子生物 takara的LaTAQ 酶扩增6K的片段 突变率高，怎么解决
获得了四个克隆，目前有三个测序，都有突变，不知道你们的有突变吗
 yu123400 2017-03-23 11:29
分子生物 最近预扩一个约7.5K片段，PCR产物检测很奇怪，请大家帮忙分析...
酶是用的Takara公司的LATaq，用两步法扩的，退火和延伸一个循环用了15min。PCR程序如下：98℃，2min；30cycles（98℃,10s;68℃，15min）；72℃，10min。PCR产物有沉淀，用水稀释后，点样，...
 bb123456789 2016-12-08 08:03
分子生物 求助！短片段（169 bp）PCR扩增，用Takara La Taq酶，不出条带呀...
因为提的DNA是混合物，现在想做克隆看看混合物的成分，就换成了Takara的Lataq，但是不出条带了呀。引物没变，PCR条件也没变。我的条件是这样的：（1）94℃5min（2）94℃30s（3）51℃30s（4...
 小胖芙芙 2016-03-05 04:02
分子生物 用挂着酶切位点的引物跑PCR结果跑不出来啊！...
引物：F：GCC酶切位点序列前端25bpR：序列末端25bp酶切位点CCG片段长是2078bp,ORF1688bp用的LATaq.PCR程序试过很多种，推荐的2step和正常的3step，还有各种退火温度都试过了。也试过用PCR...
 Ritaaaaaa 2016-01-25 01:20
分子生物 BSP上下游引物TM值差异大导致扩增不成功
由于考虑GC位点，亚硫酸盐处理后的上游可设计引物区域为：GGGTATATAATAGGGATGGGAGGATTGTATAGAGAAGTTAA；下游为：...酶为TAKARA的LATAQ。请问有何解决方法，非常感谢~
 woai43 2015-08-28 09:56
分子生物 PCR测序后产生的SNP是否是基因的真实存在的SNP？
但是根据结果来看cDNA序列与基因组序列之间SNP较多，基因组每次扩增结果建克隆测序克隆之间的SNP也比较多（约0.5~2%），使用的酶是takara的LAtaq，目前由于无法确定这些SNP中哪些是PCR出的...
 corner_g 2015-05-25 02:43
分子生物 扩增片段大小约5Kb的cDNA片段
本人最近实验要扩增一段约5Kb的cDNA（其中有1Kb左右GC含量比较高，约70%），试过各种酶都没有效果（Lataq，LawithGCbuffer,primerstar，primerstarGXL），请问有扩增过这种片段的经验的怎么...
 半半911 2015-05-02 12:14
分子生物 一个多周一直在pcr 16S，终于p出来了，没想到是这种结果。
本人初学者，最近一个周一直在...（之前用rTaq酶一直都没有P出来，改用了LATaq酶得第二幅图，第二幅图用的是TAKARA试剂盒）各位看官老爷请给个建议或者提示。没有多少金币求怜惜16s.jpg16s.jpg
 打败番茄炒蛋 2015-04-17 02:38
分子生物 本人分子生物小白一枚，刚刚开始做pcr，目前在扩cDNA的全长。
我已经设计了两对引物。...想问一下，如果改用LAtaq酶会不会效果好一些，在引物、镁离子等浓度上有什么需要注意的地方，希望各位指点一下，谢谢。上午做梯度的结果用第四第五管做二次pcr的结果
 juan_819 2015-04-15 08:41
分子生物 pcr扩增基因及测序相关问题的求助 急！
我正在扩增一个2808bp的基因因为完整序列很难一次扩出我就分了三段去扩其中中间一段为2000多bp扩出来后连接T载体挑单克隆测序一直测不出有相同序列的单克隆已经测了20多个都有碱基的不一样...
 张grape 2015-04-13 11:11
分子生物 求助关于甲基化PCR实验
最近一直在做甲基化的PCR，一直没法获得扩增的条带，模板用的是qiagen的试剂盒处理后的DNA，PCR是25ul的体系，用的宝生物的GCbuffer和LAtaq酶。反应条件95度5min，然后开始循环，95度30s，...
 raymondleung 2015-01-31 12:26
分子生物 用LATaq酶PCR的产物电泳条带拖带，能切胶回收做TA克隆吗？
用EasyTaq酶PCR后条带较为清晰，但用LATaq酶P却出现严重的拖尾，这是怎么回事？优化几次PCR条件之后，还是有这样的拖带，我能切胶回收做TA克隆吗？2015.1.22.jpg2015.1.20.jpg
 xiangqin90 2015-01-22 08:17
硕博家园 玉米3.5Kb的cDna扩增问题
用LATaq酶扩增无条带，GC含量不高，引物已检验没有问题，退火温度从65度到55度都试过，还是没有条带，恳求各位大师指点！谢谢
 涅槃之曦 2015-01-13 03:55
分子生物 EasyTaq酶能P出条带而用LATaq酶却只有弥散性条带
EasyTaq酶能P出条带而用LATaq酶却只有弥散性条带，求大神指点！
 xiangqin90 2015-01-07 06:22
分子生物 1700基因的克隆
与一个中间位置的反（正）引物一起P，可以扩增上游1300bp，下游1200bp的片段，曾经也拿MixP出过一次1700的全长，但是因为是Mix，有错配，不能用~以后拿LATaq酶P，就再也消失不见了、但是能...
 小六琦琦 2014-12-28 03:13
分子生物 pcr 重复不出来
想着要测序，然后我换了TAKARA的LATaq做了一下，几次结果都没出来，这是什么原因呢？换了ExTAQ做了一次，结果可以出来，但却有非特异性扩增，为什么呢？新手求各位大神指教！
 tinychan 2014-10-20 09:00
分子生物 高GC含量基因PCR扩增不出条带
酶用过宝生物的LATaq、rTaq酶、HOTstar等，都没扩出来，中间有一次用KOD酶扩出来条带过，不过特异性不好，而且第二次一样的条件再扩就又扩不出来了，cDNA是用内参检测过了，别的同学扩其他...
 313cr 2014-10-11 06:37
分子生物 PCR 点样后仅存在点样孔中
PCR之后进行点样，扫胶发现样品全在样品孔中，对点样孔进行胶回收后再次点样，发现胶孔依旧发亮，应该能排除蛋白污染；也通过加sds对样品处理，依旧...救命啊（酶试了高保真、EXtaq、LAtaq的）
 zhuimengjy 2014-08-25 08:31
分子生物 请问大片段怎么扩
构建好了质粒，但是目的片段将近8000bp，这种大片段用LAtaq酶一直扩不出来，请问怎么办？
 Ever希夷 2014-07-07 11:00
分子生物 关于PCR拖尾现象
PCR第一次遇到这种情况，捉急中，这个貌似也不是拖尾，三个条带中中间的是阴性对照，居然出现了更亮的条带，用的是TAKaRa的LATaq，目的条带应该是7.4Kb,反应条件是94度5min94度50s54度55s72...
 chenmy2007 2014-06-18 07:06
转基因 PCR做点基因突变结果没有突变片段
我用TAKARA的LATaq跑的pcr，质粒9K大小，质粒载体上目的片段6K，引物72个碱基，然后回收产物连T3载体，测序结果没有碱基突变啊~还有我LA酶是在98度3MIN预变性后加的，能跑出条带；...
 落风吟 2014-06-08 09:42
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