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woai43

金虫 (正式写手)

应助: 6 (幼儿园)
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虫号: 2604785
注册: 2013-08-19
性别: MM
专业: 基因表达调控与表观遗传学

[求助] BSP上下游引物TM值差异大导致扩增不成功

由于考虑GC位点，亚硫酸盐处理后的上游可设计引物区域为：GGGTATATAATAGGGATGGGAGGATTGTATAGAGAAGTTAA；下游为：GTTTTTTTAAGAGATTAGATTTTATAAATTTTTTTTTTAT。上下游GC%含量差异较大，设计引物后上游引物TAATAGGGATGGGAGGATTGTATAG，其TM值为58，下游引物TTATAAAATCTAATCTCTTAAAAAAAC，其TM值为51，尝试梯度PCR48-58度均未P出，touchdown PCR从60降至52度未P出。酶为TAKARA的LA TAQ。请问有何解决方法，非常感谢~~~

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1楼 2015-08-28 17:31:56

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