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woai43金虫 (正式写手)
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[求助]
BSP上下游引物TM值差异大导致扩增不成功
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| 由于考虑GC位点，亚硫酸盐处理后的上游可设计引物区域为：GGGTATATAATAGGGATGGGAGGATTGTATAGAGAAGTTAA；下游为：GTTTTTTTAAGAGATTAGATTTTATAAATTTTTTTTTTAT。上下游GC%含量差异较大，设计引物后上游引物TAATAGGGATGGGAGGATTGTATAG，其TM值为58，下游引物TTATAAAATCTAATCTCTTAAAAAAAC，其TM值为51，尝试梯度PCR48-58度均未P出，touchdown PCR从60降至52度未P出。酶为TAKARA的LA TAQ。请问有何解决方法，非常感谢~~~ |
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