版块导航: 正在加载中...

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (2304)
>考博 (413)
>导师招生 (385)
>招聘信息布告栏 (174)
>虫友互识 (160)
>物理 (140)
>休闲灌水 (125)
>海外博后 (30)
>基金申请 (12)
>博后之家 (10)
>留学生活 (10)
>生物材料 (10)
>留学DIY (8)
>硕博家园 (4)
>教师之家 (3)
>论文投稿 (3)

返回列表

熙源羊羊羊

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 6
帖子: 4
在线: 35分钟
虫号: 4259833
注册: 2015-12-01
专业: 生物物理、生物化学与分子

[求助] PCR总是p不出来啊，大神们求助已有5人参与

PCR总是p不出来，图中是体系跟程序，有时候配了4管一模一样的，只有一管有目的片段，后来再p一管也p不出来，稀释了模版十倍，20倍，，也没用，酶la taq..primer star 都试过，摸过梯度，现在一筹莫展。。

发自小木虫Android客户端

回复此楼

» 猜你喜欢

Calderasib理化性质与实验操作技术笔记已经有0人回复
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有186人回复
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用已经有0人回复
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项已经有0人回复
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展已经有0人回复
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点已经有0人回复
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征已经有0人回复
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗已经有25人回复
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈已经有0人回复
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点已经有0人回复

1楼 2017-04-17 16:11:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

匿名

应助: (幼儿园)
在线:
虫号: 0

本帖仅楼主可见

赞一下

3楼2017-04-17 17:33:59

已阅申请MolEPI 回复此楼编辑查看我的主页

shenshou167

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 234.6
帖子: 60
在线: 15.8小时
虫号: 1750155
注册: 2012-04-11
专业: 食品加工技术

是不是仪器的原因？

发自小木虫Android客户端

赞一下(1人)

回复此楼

4楼2017-04-17 20:54:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

shenshou167

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 234.6
帖子: 60
在线: 15.8小时
虫号: 1750155
注册: 2012-04-11
专业: 食品加工技术

按道理一模一样，可能就是仪器的问题

发自小木虫Android客户端

赞一下(1人)

回复此楼

5楼2017-04-17 20:55:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫

应助: 8 (幼儿园)
金币: 6807.7
散金: 8
红花: 14
帖子: 1439
在线: 201.6小时
虫号: 161427
注册: 2006-01-09
性别: GG
专业: 肿瘤生物治疗

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-04-19 07:46:06

1. 首先要确定你的引物设计的没问题，因为基因组上突变不较多，如果引物太短很有可能影响扩增效率，可以适当加长引物长度，或者用兼并引物；
2. 保证基因组DNA提取的纯度，这个很重要，然后是完整度；
3. 如果做过退火梯度还不行，可以试一下touchdown PCR；
4. 考察一下这段基因组DNA的GC含量，如果太高，换用LA Taq的GC buffer

赞一下(1人)

回复此楼

6楼2017-04-18 10:23:40

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

普通回帖

熙源羊羊羊

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 6
帖子: 4
在线: 35分钟
虫号: 4259833
注册: 2015-12-01
专业: 生物物理、生物化学与分子

引用回帖:

1楼: Originally posted by 熙源羊羊羊 at 2017-04-17 16:11:55
PCR总是p不出来，图中是体系跟程序，有时候配了4管一模一样的，只有一管有目的片段，后来再p一管也p不出来，稀释了模版十倍，20倍，，也没用，酶la taq..primer star 都试过，摸过梯度，现在一筹莫展。。

...

模板用的小鼠全基因组，长度4k

发自小木虫Android客户端

赞一下

回复此楼

2楼2017-04-17 16:12:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖