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chhcll

新虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增产物送测序中止,信号太弱怎么办

我做的是植物DNA条形码,但是每次PCR产物送公司测序时有一些产物信号太弱,出现中止的现象,可是我所有产物扩增体系都是一样的,DNA模板1.5微升,上下游引物各0.4微,MIX混合酶9.8微,加双蒸水到20微升的体系。
PCR也扩增出来了,请问是什么原因导致的呢?谢谢大家啦。这个是我的PCR扩增胶图

PCR扩增产物送测序中止,信号太弱怎么办


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shuhangyu

新虫 (初入文坛)

3楼2016-01-08 13:27:49
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lifechuteng

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
信号弱说明荧光标记的ddNTP没有跟模板结合释放荧光,有可能是由于模板高级结构产生这种结果,您可以尝试反向也测序一下,或者连载体之后进行测序。
4楼2016-01-08 13:55:23
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反应链

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
The standard process for DNA products sequenced, includes TA-cloning which can avoid your problem appearing.
5楼2016-01-08 15:21:05
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lordsidious

铁杆木虫 (知名作家)

Dark Lord of the Sith


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
连T载体,然后送去测序

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May the Force be with you.
6楼2016-01-08 16:02:44
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