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chhcll

新虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增产物送测序中止,信号太弱怎么办

我做的是植物DNA条形码,但是每次PCR产物送公司测序时有一些产物信号太弱,出现中止的现象,可是我所有产物扩增体系都是一样的,DNA模板1.5微升,上下游引物各0.4微,MIX混合酶9.8微,加双蒸水到20微升的体系。
PCR也扩增出来了,请问是什么原因导致的呢?谢谢大家啦。这个是我的PCR扩增胶图

PCR扩增产物送测序中止,信号太弱怎么办


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2楼2016-01-08 10:59:12
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shuhangyu

新虫 (初入文坛)

3楼2016-01-08 13:27:49
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lifechuteng

新虫 (小有名气)


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信号弱说明荧光标记的ddNTP没有跟模板结合释放荧光,有可能是由于模板高级结构产生这种结果,您可以尝试反向也测序一下,或者连载体之后进行测序。
4楼2016-01-08 13:55:23
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反应链

新虫 (正式写手)


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The standard process for DNA products sequenced, includes TA-cloning which can avoid your problem appearing.
5楼2016-01-08 15:21:05
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lordsidious

铁杆木虫 (知名作家)

Dark Lord of the Sith


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连T载体,然后送去测序

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May the Force be with you.
6楼2016-01-08 16:02:44
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lipo2014

新虫 (初入文坛)


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可能是提的质粒质量不太好的原因,我前几天也遇到了这种情况,我提的质粒送测,用的引物是自己合成的,没有问题。我的两个引物的位置一个在5‘端,另一个在目的片段中间,然后5’端的测序很好但是中间的那个引物说是没有信号,然后我又提了一次再测就行了。这个质粒质量的问题用pcr跟直接跑质粒都检测不出来的,我拿上次测序没测出来的跟这次测出来的都做了pcr跟质粒直接跑胶,没有什么区别。。。。
7楼2016-01-10 13:50:37
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原海亮

木虫 (著名写手)


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一种是连接载体测序;另一种,做个大体系的pcr,提高目的条带浓度,胶回收目的条带去测序

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
8楼2016-01-10 23:20:31
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angelyou

铁虫 (小有名气)


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建议送克隆菌液测,另外的话,可以试试换家测序公司,亲身经验,某家公司测不出来的送给另一家给测出来了

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9楼2016-01-12 01:18:40
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