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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增产物送测序中止，信号太弱怎么办
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chhcll

新虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增产物送测序中止，信号太弱怎么办

我做的是植物DNA条形码，但是每次PCR产物送公司测序时有一些产物信号太弱，出现中止的现象，可是我所有产物扩增体系都是一样的，DNA模板1.5微升，上下游引物各0.4微，MIX混合酶9.8微，加双蒸水到20微升的体系。
PCR也扩增出来了，请问是什么原因导致的呢？谢谢大家啦。这个是我的PCR扩增胶图

PCR扩增产物送测序中止，信号太弱怎么办


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1楼 2016-01-08 10:42:47
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stl409
2楼2016-01-08 10:59:12
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shuhangyu

新虫 (初入文坛)
next one

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3楼2016-01-08 13:27:49
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lifechuteng

新虫 (小有名气)
★
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信号弱说明荧光标记的ddNTP没有跟模板结合释放荧光，有可能是由于模板高级结构产生这种结果，您可以尝试反向也测序一下，或者连载体之后进行测序。
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4楼2016-01-08 13:55:23
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反应链

新虫 (正式写手)
★
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The standard process for DNA products sequenced, includes TA-cloning which can avoid your problem appearing.
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5楼2016-01-08 15:21:05
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lordsidious

铁杆木虫 (知名作家)

Dark Lord of the Sith
★
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连T载体，然后送去测序

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May the Force be with you.
6楼2016-01-08 16:02:44
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lipo2014

新虫 (初入文坛)
★
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可能是提的质粒质量不太好的原因，我前几天也遇到了这种情况，我提的质粒送测，用的引物是自己合成的，没有问题。我的两个引物的位置一个在5‘端，另一个在目的片段中间，然后5’端的测序很好但是中间的那个引物说是没有信号，然后我又提了一次再测就行了。这个质粒质量的问题用pcr跟直接跑质粒都检测不出来的，我拿上次测序没测出来的跟这次测出来的都做了pcr跟质粒直接跑胶，没有什么区别。。。。
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7楼2016-01-10 13:50:37
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原海亮

木虫 (著名写手)
★
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一种是连接载体测序；另一种，做个大体系的pcr，提高目的条带浓度，胶回收目的条带去测序

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
8楼2016-01-10 23:20:31
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angelyou

铁虫 (小有名气)
★
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建议送克隆菌液测，另外的话，可以试试换家测序公司，亲身经验，某家公司测不出来的送给另一家给测出来了

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9楼2016-01-12 01:18:40
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