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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 自己悲催也就够了，还还得同学悲剧——感受态坑死人
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献

[求助] 自己悲催也就够了，还还得同学悲剧——感受态坑死人

新制的感受态长满平板出现假阳性，为何？  
自己用CaCl2法新制的感受态，预试验用自己扩的基因连18T载体，到17小时后才长满菌落，菌落PCR也很亮。我就用不同模板（十几个）同一引物的扩增产物连接转化，全部都长满了，只是菌落大小有的不一样。昨天同学用我的感受态转了十几个，结果，是长了菌落，但不多，但是菌落PCR无带，她同时用别人买的感受态菌落PCR扩增条带很漂亮！！我的全是假阳性啊……害得她那么多功夫白费了！被实验打击得感觉自己什么都做不好啊！万幸的是我的样没送测序，哎……
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Dripping Concentrated!!energetic and active！
1楼 2012-11-28 13:01:13
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等月上弦

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hxswdl: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-12-02 09:51:55
认识到错误就重头再来，人不怕失败，就怕没有重新来过的勇气，加油！
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加油加油！
2楼2012-11-28 13:58:48
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hxswdl: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-12-02 09:51:23
怎么感觉不是感受态的问题啊？
不过假阳性很多，可能是你同学转化时候处理的不好，毕竟自己做的感受态是不如商业的感受态的。
不管怎么样，总算找到原因了，不要气馁，加油。
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3楼2012-11-28 15:35:48
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lvye3707

金虫 (正式写手)
感受态和假阳性有什么关系么？我的连T载体也是假阳性呢，有点愁
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hxswdl
4楼2012-11-28 16:21:43
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hxswdl: 金币+8, ★★★很有帮助 2012-12-02 09:51:34
个人觉得感受态跟假阳性是没有关系的…………假阳性说明菌有AMP抗性，有抗性说明有质粒转进去了，除非你长过头了，挑的菌都是卫星菌落，只能说明你连接出的问题……跟感受态没啥关系.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2012-11-28 20:14:20
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献
引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2012-11-28 15:35:48
怎么感觉不是感受态的问题啊？
不过假阳性很多，可能是你同学转化时候处理的不好，毕竟自己做的感受态是不如商业的感受态的。
不管怎么样，总算找到原因了，不要气馁，加油。

我是通过她的菌落PCR情况来判断我的是假阳性的
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Dripping Concentrated!!energetic and active！
6楼2012-11-28 22:56:59
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献
引用回帖:
5楼: Originally posted by Marado at 2012-11-28 20:14:20
个人觉得感受态跟假阳性是没有关系的…………假阳性说明菌有AMP抗性，有抗性说明有质粒转进去了，除非你长过头了，挑的菌都是卫星菌落，只能说明你连接出的问题……跟感受态没啥关系.

她同一批连的产物，转到商业化的感受态，做菌落PCR带很漂亮，但是，用我的感受态就不行了
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7楼2012-11-28 22:58:22
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by hxswdl at 2012-11-28 22:58:22
她同一批连的产物，转到商业化的感受态，做菌落PCR带很漂亮，但是，用我的感受态就不行了...

菌落PCR可靠性不高，假阳性概率比较大，感受态只影响转化效率，跟假阳性是没什么关系的，假阳性的多是连接的时候发生的载体自连.建议做个酶切.
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8楼2012-11-29 08:44:14
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changyi_23

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
找出问题所在 从新做咯 这种现象正常
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9楼2012-11-29 08:50:10
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hallen6891

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人觉得只是你的感受态效率有点低，毕竟自己做的和商业无法比，但是和假阳性无关，假阳性只是说明连接的过程中出现自连的情况比较多，你可以转一个已知质粒判断一下你的感受态效率。我之前也遇到过这样的情况，同样的连接产物用自己制作的感受态长得克隆数目少，甚至于不长，商业的就长出来很多，但是自己做的转化质粒没问题。
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hxswdl
生活要好好过！
10楼2012-11-29 15:42:05
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