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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 自己悲催也就够了，还还得同学悲剧——感受态坑死人
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至尊木虫 (文坛精英)

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8楼: Originally posted by Marado at 2012-11-29 08:44:14
菌落PCR可靠性不高，假阳性概率比较大，感受态只影响转化效率，跟假阳性是没什么关系的，假阳性的多是连接的时候发生的载体自连.建议做个酶切....

我又做了一个板的菌落pcr，不过引物不是之前的2个都是扩基因用的ＦＲ引物（不是载体２对引物，扩出带来了就说明不是载体自连的），这次用的引物一个是载体上的一个是基因特异的，扩出来的条带比之前的大了１００ｂｐ左右，只有１０个有２个带很暗，可能是菌太少，没挑上。后来同学又换了隔壁实验室老师用ＴＳＳ法制的超级感受态，原来有问题的几个，还是长得不多，菌落ｐｃｒ也无带
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11楼2012-12-02 09:39:13
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10楼: Originally posted by hallen6891 at 2012-11-29 15:42:05
个人觉得只是你的感受态效率有点低，毕竟自己做的和商业无法比，但是和假阳性无关，假阳性只是说明连接的过程中出现自连的情况比较多，你可以转一个已知质粒判断一下你的感受态效率。我之前也遇到过这样的情况，同样 ...

我用自己的连接产物就每个都长满了平板，都不好挑菌了，只是可能转瓶扩大培养时过了点，长到１６ｈ菌才长出来，谢谢你的回答
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12楼2012-12-02 09:44:03
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4楼: Originally posted by lvye3707 at 2012-11-28 16:21:43
感受态和假阳性有什么关系么？我的连T载体也是假阳性呢，有点愁

看来是我武断下了结论，可能不是假阳性，谢谢你
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13楼2012-12-02 09:48:41
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