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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献

[求助] 自己悲催也就够了,还还得同学悲剧——感受态坑死人

新制的感受态长满平板出现假阳性,为何?  
自己用CaCl2法新制的感受态,预试验用自己扩的基因连18T载体,到17小时后才长满菌落,菌落PCR也很亮。我就用不同模板(十几个)同一引物的扩增产物连接转化,全部都长满了,只是菌落大小有的不一样。昨天同学用我的感受态转了十几个,结果,是长了菌落,但不多,但是菌落PCR无带,她同时用别人买的感受态菌落PCR扩增条带很漂亮!!我的全是假阳性啊……害得她那么多功夫白费了!被实验打击得感觉自己什么都做不好啊!万幸的是我的样没送测序,哎……
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Dripping Concentrated!!energetic and active!
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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hxswdl: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-12-02 09:51:23
怎么感觉不是感受态的问题啊?
不过假阳性很多,可能是你同学转化时候处理的不好,毕竟自己做的感受态是不如商业的感受态的。
不管怎么样,总算找到原因了,不要气馁,加油。
3楼2012-11-28 15:35:48
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等月上弦

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hxswdl: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-12-02 09:51:55
认识到错误就重头再来,人不怕失败,就怕没有重新来过的勇气,加油!
加油加油!
2楼2012-11-28 13:58:48
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lvye3707

金虫 (正式写手)

感受态和假阳性有什么关系么?我的连T载体也是假阳性呢,有点愁

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4楼2012-11-28 16:21:43
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hxswdl: 金币+8, ★★★很有帮助 2012-12-02 09:51:34
个人觉得感受态跟假阳性是没有关系的…………假阳性说明菌有AMP抗性,有抗性说明有质粒转进去了,除非你长过头了,挑的菌都是卫星菌落,只能说明你连接出的问题……跟感受态没啥关系.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2012-11-28 20:14:20
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