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兜兜斑斑

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA提取相关问题 已有1人参与

用生工的Trizol提取小鼠脑组织总RNA,1,2孔为同一个样本,3,4孔为同一个样本,5,6孔为同一样本,加的都是1ml的Trizol,1/4的小脑。结果如图,最上面有一条带,这是由于DNA污染了吗?是否可以接着用Takala家的反转录试剂盒进行反转录后以此为模板做荧光定量PCR?如果不可以我该怎样避免这个问题?初学荧光,请高人指点,感激不尽!!!

RNA提取相关问题
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许欧阳紫儿

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
兜兜斑斑: 金币+8, 有帮助 2015-12-12 21:54:11
你加的marker是什么?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-12-10 23:06:48
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404991634

至尊木虫 (著名写手)

不能用此做,DNA会严重干扰荧光定量结果,建议重提

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无所畏惧
3楼2015-12-10 23:47:43
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兜兜斑斑

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 许欧阳紫儿 at 2015-12-10 23:06:48
你加的marker是什么?

加的是DNA2000的marker

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-12-12 21:53:59
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兜兜斑斑

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 404991634 at 2015-12-10 23:47:43
不能用此做,DNA会严重干扰荧光定量结果,建议重提

重新提取好几次了,在氯仿离心后上清剩了好多,最大限度的避免取到中间层,但是还是有些许污染,还可能是其他操作上存在的问题么?

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-12-12 21:57:50
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丝竹睛明

新虫 (小有名气)

有dna污染,有蛋白污染。上清少吸(不超过250),氯仿抽提两边。

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6楼2016-01-03 23:18:06
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wjxzqh

新虫 (初入文坛)

组织提还能用氯仿抽提两遍吗?还是第一次遇到

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7楼2016-09-07 18:42:57
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