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573009018

金虫 (初入文坛)

小硕在读

[交流] RNA提取相关疑问!!!

小弟第三次提RNA了,条带较模糊,似有拖带现象,三条带不明显,不明白哪里出了问题(可以确定的是操作可能比较慢),请有经验懂行的前辈指点!结果如图。

RNA提取相关疑问!!!
IMG_20150729_192334.jpg
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liulingjun15

金虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-30 23:23:21
很明显降解了,操作上要注意,所有EP管,枪头都要无RNA酶
5楼2015-07-30 18:47:42
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)

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573009018: 金币+8 2015-07-31 16:50:29
哥们,你一次性做这么样品干嘛???样品越多,费的时间越多,RNA降解的可能性越大!还不如一次只提取4个样品。。。你从肝细胞里提取RNA么?另外你电泳得点marker啊
一般提取RNA,要求用刚拆不久的进口的EP管,吸头,国产货一般要DEPC水处理,麻烦。。。加了氯仿振荡要激烈,吸取上清时不能吸到沉淀。一般在实验桌上操作就可以了,不放心的话放超净台里操作,区别只是后者不用戴口罩。下次电泳记得点marker。提取到RNA后要赶紧反转或者超低温保存。
另外你用试剂盒还是RNAplus、Trizol提取的?
7楼2015-07-31 10:12:44
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)


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引用回帖:
9楼: Originally posted by 573009018 at 2015-07-31 16:52:50
Trizol   不是加了这个以后就可以防降解么
...

只是有trizol这一步可以抑制RNase,其他步骤一定要小心
10楼2015-08-01 14:06:39
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weiyounuli

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
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573009018: 金币+1 2015-07-31 16:49:05
573009018: 金币+1 2015-07-31 16:51:37
我都提了好几次了,加油!
2楼2015-07-30 08:06:48
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peng1997

新虫 (小有名气)

部分降解吧
3楼2015-07-30 14:18:32
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一叶扁周

新虫 (小有名气)


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降解了,RNA不稳定吗,很容易降解的
4楼2015-07-30 15:19:19
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xiaochong8693

木虫之王 (文坛精英)


573009018: 金币+1 2015-07-31 16:51:22
为楼主留下满满的祝福
祝福楼主和各位虫友清凉一夏,事事如意,梦想成真!
6楼2015-07-30 20:12:16
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)


573009018: 金币+1 2015-07-31 16:50:52
降解了
每天坚持一点点,终会成功!相信自己
8楼2015-07-31 15:04:09
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573009018

金虫 (初入文坛)

小硕在读

引用回帖:
7楼: Originally posted by yufeiwaner at 2015-07-31 10:12:44
哥们,你一次性做这么样品干嘛???样品越多,费的时间越多,RNA降解的可能性越大!还不如一次只提取4个样品。。。你从肝细胞里提取RNA么?另外你电泳得点marker啊
一般提取RNA,要求用刚拆不久的进口的EP管,吸头 ...

Trizol   不是加了这个以后就可以防降解么

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2015-07-31 16:52:50
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