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liangpz

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[求助] 提取RNA时，有谁用过水饱和酚配试剂吗？几个提取相关问题，求帮助啊！

新人最近提植物的RNA，老板指定用一个新改进的CTAB/酸酚法。有几处不懂的地方想问问提取RNA的前辈们~~回答有用的话有金币啦，请大家帮帮忙啊！！~

1  方法文献里面是：Extraction buffer II Acidic phenol (pH 4.5) (Sigma,USA), 2.5 M sodium chloride (Sigma, USA), 0.5% SDS.
这是用水饱和酚做缓冲液Ⅱ的溶剂的意思吗，要配置100ml的缓冲液Ⅱ，就吸取100ml水饱和酚，直接向里面加入NaCl和SDS溶解就行了？
水饱和酚是吸取下层使用吗？最后配好缓冲液后，用吸取一些原来水饱和酚的上层保护液进行保护吗？

2  缓冲液Ⅰ是：CTAB, 2% (w/v)；3.5 M 硫氰酸胍 (GTC)；100 mM 柠檬酸缓冲液 (pH 4.5)；3 M 醋酸钾；1.0% 十二烷基磺酸钠 (SDS) (使用前加入)；RNase-free水定容。
想问问大家，配含有CTAB的试剂时，是不是应该最后加CTAB？否则配出来的试剂最上面会有一层白色的沫，感觉像是CTAB不溶，即便摇匀也一会儿就又分层了。

3  最后是配好的试剂用高压灭菌吗？异硫氰酸胍和水饱和酚都不稳定，都不能灭吧？就只剩下 LiCl能灭一下了。

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1楼2013-11-25 16:00:18

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小米哆

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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liangpz: 金币+5, ★有帮助 2013-11-26 15:44:59

楼主这方法就是异硫氰酸胍的提RNA方法，是很成熟的一种提法，是我们实验室通用的，我经常用这个方法，很好用，我发给你吧。你看了还有问题再问。
百度网盘链接http://pan.baidu.com/s/1zPclO

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米哆神请赐我力量！

2楼2013-11-25 22:15:43

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liangpz

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 小米哆 at 2013-11-25 22:15:43
楼主这方法就是异硫氰酸胍的提RNA方法，是很成熟的一种提法，是我们实验室通用的，我经常用这个方法，很好用，我发给你吧。你看了还有问题再问。
百度网盘链接http://pan.baidu.com/s/1zPclO

只是部分试剂一样，但并不是你的这种方法。我CTAB和异硫氰酸胍同在一个缓冲液里，不知道怎么溶解比较好溶。不过写的很细致，还是有帮助，谢谢啦~

另外你后面有的标注大量法，就是所有材料和试剂都成相同倍数增加吗？

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3楼2013-11-26 15:44:15

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