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提取RNA时，有谁用过水饱和酚配试剂吗？几个提取相关问题，求帮助啊！
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新人最近提植物的RNA，老板指定用一个新改进的CTAB/酸酚法。有几处不懂的地方想问问提取RNA的前辈们~~回答有用的话有金币啦，请大家帮帮忙啊！！~ 1 方法文献里面是：Extraction buffer II Acidic phenol (pH 4.5) (Sigma,USA), 2.5 M sodium chloride (Sigma, USA), 0.5% SDS. 这是用水饱和酚做缓冲液Ⅱ的溶剂的意思吗，要配置100ml的缓冲液Ⅱ，就吸取100ml水饱和酚，直接向里面加入NaCl和SDS溶解就行了？ 水饱和酚是吸取下层使用吗？最后配好缓冲液后，用吸取一些原来水饱和酚的上层保护液进行保护吗？ 2 缓冲液Ⅰ是：CTAB, 2% (w/v)；3.5 M 硫氰酸胍 (GTC)；100 mM 柠檬酸缓冲液 (pH 4.5)；3 M 醋酸钾；1.0% 十二烷基磺酸钠 (SDS) (使用前加入)；RNase-free水定容。 想问问大家，配含有CTAB的试剂时，是不是应该最后加CTAB？否则配出来的试剂最上面会有一层白色的沫，感觉像是CTAB不溶，即便摇匀也一会儿就又分层了。 3 最后是配好的试剂用高压灭菌吗？异硫氰酸胍和水饱和酚都不稳定，都不能灭吧？就只剩下 LiCl能灭一下了。 |
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6楼2013-11-27 11:21:16
【答案】应助回帖
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liangpz: 金币+5, ★有帮助 2013-11-26 15:44:59
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liangpz: 金币+5, ★有帮助 2013-11-26 15:44:59
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楼主这方法就是异硫氰酸胍的提RNA方法，是很成熟的一种提法，是我们实验室通用的，我经常用这个方法，很好用，我发给你吧。你看了还有问题再问。 百度网盘链接http://pan.baidu.com/s/1zPclO |
2楼2013-11-25 22:15:43
3楼2013-11-26 15:44:15
4楼2013-11-27 08:37:55