应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何使用水饱和酚？
101/1返回列表
查看: 2743  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fusheng011

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何使用水饱和酚？ 已有4人参与

大家好 请教个问题 我把我的质粒用体外转录试剂盒体外转录后 说明书上说要对转录后的RNA进行纯化 其中有一步说用酚/氯仿（1:1比例）抽提 请问大家谁用过酚/氯仿（1:1比例）这个是如何配制的呀？

另外，请教大家谁用过用过水饱和酚？我直接从生物公司买到了一瓶水饱和酚 但是看到有分层（分上下两层，下层比较多）摇荡均匀静止后马上又出现分层 我不知道用的时候是吸取上层用还是吸取下层用 麻烦指教！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-08 20:14:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evebobo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
上层是水  下层是酚  就是体积比   然后混匀
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-07-08 20:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fusheng011

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by evebobo at 2010-07-08 20:59:15:
上层是水  下层是酚  就是体积比   然后混匀

请问您用过水饱和酚吗？详细说下是怎么用的？用之前混匀用还是直接吸取下层的液相用呢？谢谢了！
赞一下 回复此楼
3楼2010-07-08 21:05:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evebobo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
上层是水  下层是酚  所以是直接吸下层就可以  
用过 提DNA的时候
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-07-08 21:07:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
水饱和酚上层是水，两个作用：一是水封，防止下层酚接触空气被氧化；二是保证下层的酚里水的饱和度。

酚：氯仿=1:1就是水饱和酚（RNA纯化用水饱和酚，DNA纯化用Tris饱和酚）和氯仿等体积混匀。12000rpm离心2min，弃掉上层析出的水，用下层的有机相抽提核酸溶液。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-07-08 21:08:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
为什么是水饱和酚，不是tris饱和平衡酚吗？
tris饱和平衡酚下层才是酚，直接抽取下层用
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-07-08 21:09:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evebobo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-08 21:09:14:
为什么是水饱和酚，不是tris饱和平衡酚吗？
tris饱和平衡酚下层才是酚，直接抽取下层用

都差不多  反正都是下层
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-07-08 21:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fusheng011

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-07-08 21:08:11:
水饱和酚上层是水，两个作用：一是水封，防止下层酚接触空气被氧化；二是保证下层的酚里水的饱和度。

酚：氯仿=1:1就是水饱和酚（RNA纯化用水饱和酚，DNA纯化用Tris饱和酚）和氯仿等体积混匀。12000rpm离心2mi ...

您好 再请教一下 按照您说的 那我要做转录后RNA的纯化 按照步骤 我需要先配制1:1的酚氯仿 就是把买回的水饱和酚和氯仿等体积混合 然后高速离心后弃掉上层的水相就是1:1的酚氯仿了 然后拿着1:1的酚氯仿进行下步的操作 对吧？

如果我是提取或者纯化DNA的话 1:1的酚氯仿就要用Tris饱和酚和氯仿等体积混合然后离心 是这样的吗？谢谢
赞一下 回复此楼
8楼2010-07-08 21:28:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-09 08:02:03
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-08 21:09:14:
为什么是水饱和酚，不是tris饱和平衡酚吗？
tris饱和平衡酚下层才是酚，直接抽取下层用

水饱和酚是用水饱和的苯酚，苯酚羟基上的氢可以解离，因此显酸性
Tris饱和酚是用Tris缓冲液饱和的苯酚，使用的Tris缓冲液pH=8.0，碱性。

在碱性条件下，RNA的磷酸二酯键不稳定。因此纯化DNA时用Tris饱和酚，纯化RNA时用水饱和酚
赞一下(3人) 回复此楼
9楼2010-07-08 22:07:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by fusheng011 at 2010-07-08 21:28:34:


您好 再请教一下 按照您说的 那我要做转录后RNA的纯化 按照步骤 我需要先配制1:1的酚氯仿 就是把买回的水饱和酚和氯仿等体积混合 然后高速离心后弃掉上层的水相就是1:1的酚氯仿了 然后拿着1:1的酚氯仿进行下步 ...

是这样的
回复此楼
10楼2010-07-08 22:07:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fusheng011 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭