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fusheng011

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何使用水饱和酚? 已有4人参与

大家好 请教个问题 我把我的质粒用体外转录试剂盒体外转录后 说明书上说要对转录后的RNA进行纯化 其中有一步说用酚/氯仿(1:1比例)抽提 请问大家谁用过酚/氯仿(1:1比例)这个是如何配制的呀?

另外,请教大家谁用过用过水饱和酚?我直接从生物公司买到了一瓶水饱和酚 但是看到有分层(分上下两层,下层比较多)摇荡均匀静止后马上又出现分层 我不知道用的时候是吸取上层用还是吸取下层用 麻烦指教!!
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evebobo

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
上层是水  下层是酚  所以是直接吸下层就可以  
用过 提DNA的时候
4楼2010-07-08 21:07:23
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evebobo

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
上层是水  下层是酚  就是体积比   然后混匀
2楼2010-07-08 20:59:15
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fusheng011

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by evebobo at 2010-07-08 20:59:15:
上层是水  下层是酚  就是体积比   然后混匀

请问您用过水饱和酚吗?详细说下是怎么用的?用之前混匀用还是直接吸取下层的液相用呢?谢谢了!
3楼2010-07-08 21:05:18
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ben1147

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
水饱和酚上层是水,两个作用:一是水封,防止下层酚接触空气被氧化;二是保证下层的酚里水的饱和度。

酚:氯仿=1:1就是水饱和酚(RNA纯化用水饱和酚,DNA纯化用Tris饱和酚)和氯仿等体积混匀。12000rpm离心2min,弃掉上层析出的水,用下层的有机相抽提核酸溶液。
5楼2010-07-08 21:08:11
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