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tuzilanlan

新虫 (初入文坛)

[交流] HPLC 液相出峰问题 已有15人参与

做液相的时候,换了一台机器,重新打标线的时候发现标线中标准样品出峰时间都为14min左右,但是实验样品中出峰时间都为6min左右,这是为什么?
标准样品中配制时可能有机溶剂比例较高(母液用纯乙腈溶解,之后用去离子水稀释的),
另外标准样品的实验样品的pH测过差不多的,仪器的流动相比例、温度都是固定的,
还可能有哪些原因导致出峰时间不一样啊?
大神求助!!!
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yan1984

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果其他条件(包括色谱柱)都一样的话,最大的可能就是流速不够或有点堵。
3楼2015-12-02 17:23:40
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chenxj2832

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by tuzilanlan at 2015-12-03 15:37:42
同一根柱子。

看了你的描述,严重怀疑你的样品和对照品不是同一个东西。

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7楼2015-12-04 12:41:42
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chenxj2832

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
色谱柱是同一根吗?

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2楼2015-12-02 13:38:08
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zhaolianhai

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果是等度的,可能就是泵流速问题,如果是梯度的,有可能是有机相的泵流速慢了。环境温度或者柱温也正常?样品用什么溶解的,对保留时间的影响不至于那么大的,最可能的还是泵流速

发自小木虫Android客户端
4楼2015-12-02 23:17:31
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tuzilanlan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaolianhai at 2015-12-02 23:17:31
如果是等度的,可能就是泵流速问题,如果是梯度的,有可能是有机相的泵流速慢了。环境温度或者柱温也正常?样品用什么溶解的,对保留时间的影响不至于那么大的,最可能的还是泵流速
...

泵流速设置为1ml/min,等度洗脱,样品用乙腈溶解,拿水稀释,流动相乙腈:水=70:30. 样品是一起进去的,前7个为标准样品,后7个为实验样品,标准样品中全为14min出峰,实验品为6min出峰,
5楼2015-12-03 15:37:16
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tuzilanlan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenxj2832 at 2015-12-02 13:38:08
色谱柱是同一根吗?

同一根柱子。
6楼2015-12-03 15:37:42
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Yxijaier

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by chenxj2832 at 2015-12-04 12:41:42
看了你的描述,严重怀疑你的样品和对照品不是同一个东西。
...

一般不会出现这种情况才对啊
提供专业级ChIP-seq、ATAC-seq、MeRIP-seq、RIP-seq等表观技术服务
8楼2015-12-05 23:23:56
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孙一妹

至尊木虫 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你不会是漏液了吧!我有次漏液就导致出峰晚,要不就是有些堵,流速不行

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9楼2015-12-05 23:26:50
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匿名

用户注销 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
10楼2015-12-05 23:28:20
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