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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】液相中进流动相出峰的问题
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yang20046143

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】液相中进流动相出峰的问题已有6人参与

Sample Text各位大侠：本人在做HPLC分析的过程中遇到如下问题，希望能得到高手指教，万分感谢！！！
以缓冲盐-乙腈=60：40为流动相平衡柱子（250mm长）后，分三种情况进流动相：
1、配置好的流动相直接进样，约三分钟出出现一个小鼓包，峰高约为0.1；稳定出峰，重现性好。
2、将流动相过0.45微米的有机滤膜进样，约三分钟出现一个峰，峰高为1 ；出峰峰高略有差异。
3、直接从过柱子的流动相瓶子中抽取流动相进样，约三分钟出出现一个小鼓包，峰高约为0.1；稳定出峰，但在重复进样发现有一针出了一个接近于情况2的峰。
百思不得其解，痛苦中... ...
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存在即是被需要
1楼2012-03-14 21:40:22
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
三分钟是你的死体积地方，没保留的都会出峰，你峰大小不一样的可能是有好几种物质。进流动相本该没吸收的，是不是稍微有点气泡的缘故。
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心似白云常自在，意如流水任东西。
2楼2012-03-15 08:13:36
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yang20046143

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by leecius at 2012-03-15 08:13:36:
三分钟是你的死体积地方，没保留的都会出峰，你峰大小不一样的可能是有好几种物质。进流动相本该没吸收的，是不是稍微有点气泡的缘故。

气泡能从哪里引入呢？进样时很小心的应该不会产生气泡才对，还有就是将走柱子的流动相进样时峰很小，一旦再次过膜峰就会变大... ...
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存在即是被需要
3楼2012-03-15 10:40:45
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xumiaoyun

铜虫 (小有名气)
★ ★
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leecius: 金币+1, 谢谢帮助。 2012-03-16 08:48:11
缓冲盐是必须的过滤的，你进样品时候是不是走的梯度条件？梯度变化很大时候也容易产生系统峰，
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4楼2012-03-15 13:59:23
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ME_CALL

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-03-16 08:48:16
出峰在三分钟，对25cm的柱子来说是死体积，可能是溶剂峰，也可能是检测池或泵内有气泡，建议拿掉柱子大流速冲洗下整个液相系统，还有就是你的流动相有没有除气泡，一般超声10分钟左右，实在不能排除的话，其实三分钟的出峰应该不影响你后续的分离分析，对待测物无干扰，勉强就做了吧，哈哈
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yang20046143
5楼2012-03-15 16:13:40
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
简单说就是你的样品里没保留的东西都在3分钟出来了。
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心似白云常自在，意如流水任东西。
6楼2012-03-16 08:47:49
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henrykaka

铁杆木虫 (正式写手)

henry
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karl2100: 金币+1, 3Q 2012-03-29 22:20:04
2、将流动相过0.45微米的有机滤膜进样，约三分钟出现一个峰，峰高为1 ；出峰峰高略有差异
缓冲盐是不是无机盐啊，那应该过水相滤膜，这个不知道有没有差异。流动相必须得超声去气泡20min 左右吧
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goodgoodstudyfordoctor-graduate!!!
7楼2012-03-16 09:02:16
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charlin230

银虫 (小有名气)
★ ★
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karl2100: 金币+1, 谢谢回复！ 2012-03-29 22:20:27
1，有机滤膜有可能部分脱落，在250nm照射下有降解。
2，水质，确保水中有机物或其他有紫外吸收的成分除尽。
3，流动相中产生了小气泡很常见的。
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纳米药物递送制备
8楼2012-03-16 10:29:10
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zoomdoom

银虫 (小有名气)
★ ★
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karl2100: 金币+1, 3Q 2012-03-29 22:20:45
基线一定要平衡好，你走基线要是也能出峰，说明柱子有残留，就多冲才可以~
平衡好的柱子出现上述情况的几率要小很多，还有就是要确定你上一针样品在柱子里走完了，不能有残留~
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做真实的，做最好的！
9楼2012-03-16 11:26:04
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yang20046143

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by ME_CALL at 2012-03-15 16:13:40:
出峰在三分钟，对25cm的柱子来说是死体积，可能是溶剂峰，也可能是检测池或泵内有气泡，建议拿掉柱子大流速冲洗下整个液相系统，还有就是你的流动相有没有除气泡，一般超声10分钟左右，实在不能排除的话，其实三分 ...

谢谢大家的相助，定当尽心尽力找出解决办法
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存在即是被需要
10楼2012-03-29 21:50:14
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