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xinji

铜虫 (小有名气)

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[求助] HPLC出峰问题

液相色谱C18色谱柱压力为5MPa，并且出峰时间延迟，出峰也只是又矮又胖的小峰，并有多峰连接，这是色谱柱堵了吗，还是其他原因？

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心若在，梦就在！

1楼 2012-07-22 23:25:25

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houqian387

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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lihongyan424: 金币+1, 感谢应助，辛苦 2012-07-23 07:50:56
soundhorizo: 金币+1 2012-07-23 07:57:56

楼主给的信息不多，光看压力无法判断是不是堵了，因为柱长，粒径，流动相种类都会影响柱压。
如果想看柱效有没有问题，就用色谱柱性能报告上面的方法检测柱效，看柱压，理论踏板数，脱尾等比出厂差多少就知道了？
如果和出厂差不多，可能就是你方法或系统的问题了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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2楼2012-07-23 07:10:00

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凤凰-涅磐

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【答案】应助回帖

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应该是起“离子对”的作用吧。在做多肽类样品的时候，300A孔径的填料相对100A孔径肯定要选择性好点，也就是分离度相对比较好点。流动相加入TFA，在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸 (TFA) 作为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。
三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方便地从制备样品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于 200nm ，对多肽在低波长处的检测干扰很小。
不知对不对