应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » gateway bp反应求助
51/1返回列表
查看: 4741  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaoblackdog

新虫 (初入文坛)

[求助] gateway bp反应求助 已有2人参与

pcr之后切胶回收，纯化过柱之后进行bp反应的，可是就是bp反应做不出来，本来pcr产物是3400bp的，ccdb是1000多么，奇怪的是bp反应之后质粒和pDONR比变小了，也就是发生是bp反应，但重组的东西不对，测序结果显示是目标产物中的一个300多的片段。我手上2个基因，都是相同的情况，简直无语了，求教有没有遇到类似情况解决的大神。真的搞的莫不找头脑了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-11-23 22:32:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院里的枣

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by stone2239 at 2016-10-31 12:41:44
我的当时挑了200多个才筛到，但原因主要是插入片段过大，超过8K，不容易连，你的插入长度应该不会这么高的假阳性，不知你每个挑了多少菌落来筛？...

三十个板子，每个挑了八个，挑出来有几个，测序说成功率太低，两百多个菌，有七八个条带差不多对的，测序也说不合适，我用attb1.attb2.扩不出来，是用特异性引物扩出来的那几个，用m13f.r.扩出来的就在500bp一下

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-10-31 12:49:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这就是假阳性，我以前做也有这种情况，多挑菌落做PCR，提了质粒先和空载体一起跑电泳，大小不对直接pass。
赞一下 回复此楼
2楼2015-11-24 14:46:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoblackdog

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-11-24 14:46:44
这就是假阳性，我以前做也有这种情况，多挑菌落做PCR，提了质粒先和空载体一起跑电泳，大小不对直接pass。

挑了很多，但每次都是这样，请问你们挑了多少么，而且同实验室做别的基因没问题
赞一下 回复此楼
3楼2015-11-24 18:22:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoblackdog at 2015-11-24 18:22:03
挑了很多，但每次都是这样，请问你们挑了多少么，而且同实验室做别的基因没问题...

我当时片段是8k多，检测了近两百个终于晒到了。差点就放弃了。
赞一下 回复此楼
4楼2015-11-24 19:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 帮忙看看fileCode +4 wwncly 2026-08-10 8/400 2026-08-10 22:07 by demonstreets
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 15/750 2026-08-10 19:29 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭