24小时热门版块排行榜    

查看: 4551  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiaoblackdog

新虫 (初入文坛)

[求助] gateway bp反应求助 已有2人参与

pcr之后切胶回收,纯化过柱之后进行bp反应的,可是就是bp反应做不出来,本来pcr产物是3400bp的,ccdb是1000多么,奇怪的是bp反应之后质粒和pDONR比变小了,也就是发生是bp反应,但重组的东西不对,测序结果显示是目标产物中的一个300多的片段。我手上2个基因,都是相同的情况,简直无语了,求教有没有遇到类似情况解决的大神。真的搞的莫不找头脑了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院里的枣

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by stone2239 at 2016-10-31 12:41:44
我的当时挑了200多个才筛到,但原因主要是插入片段过大,超过8K,不容易连,你的插入长度应该不会这么高的假阳性,不知你每个挑了多少菌落来筛?...

三十个板子,每个挑了八个,挑出来有几个,测序说成功率太低,两百多个菌,有七八个条带差不多对的,测序也说不合适,我用attb1.attb2.扩不出来,是用特异性引物扩出来的那几个,用m13f.r.扩出来的就在500bp一下

发自小木虫Android客户端
9楼2016-10-31 12:49:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这就是假阳性,我以前做也有这种情况,多挑菌落做PCR,提了质粒先和空载体一起跑电泳,大小不对直接pass。
2楼2015-11-24 14:46:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoblackdog

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-11-24 14:46:44
这就是假阳性,我以前做也有这种情况,多挑菌落做PCR,提了质粒先和空载体一起跑电泳,大小不对直接pass。

挑了很多,但每次都是这样,请问你们挑了多少么,而且同实验室做别的基因没问题
3楼2015-11-24 18:22:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoblackdog at 2015-11-24 18:22:03
挑了很多,但每次都是这样,请问你们挑了多少么,而且同实验室做别的基因没问题...

我当时片段是8k多,检测了近两百个终于晒到了。差点就放弃了。
4楼2015-11-24 19:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 263求调剂 +4 yqdszhdap- 2026-03-22 4/200 2026-03-22 21:20 by 1144970272
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 305分求调剂(食品工程) +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 085601专硕,总分342求调剂,地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
信息提示
请填处理意见