24小时热门版块排行榜    

查看: 4743  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiaoblackdog

新虫 (初入文坛)

[求助] gateway bp反应求助 已有2人参与

pcr之后切胶回收,纯化过柱之后进行bp反应的,可是就是bp反应做不出来,本来pcr产物是3400bp的,ccdb是1000多么,奇怪的是bp反应之后质粒和pDONR比变小了,也就是发生是bp反应,但重组的东西不对,测序结果显示是目标产物中的一个300多的片段。我手上2个基因,都是相同的情况,简直无语了,求教有没有遇到类似情况解决的大神。真的搞的莫不找头脑了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院里的枣

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2015-11-24 19:27:31
我当时片段是8k多,检测了近两百个终于晒到了。差点就放弃了。...

楼主的问题解决了吗,我做bp反应也遇到了类似问题,克隆30个基因的启动子,做完bp反应后,pcr验证发现假阳性特别高,基本没有,目的片段本来是差不多都是2000左右,用m13通用引物扩增,片段很多都小于500,怎么办,载体也换过试了,基因也重新克隆了,同样的问题,生无可恋了,期待楼主答复
7楼2016-10-30 22:37:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这就是假阳性,我以前做也有这种情况,多挑菌落做PCR,提了质粒先和空载体一起跑电泳,大小不对直接pass。
2楼2015-11-24 14:46:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoblackdog

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-11-24 14:46:44
这就是假阳性,我以前做也有这种情况,多挑菌落做PCR,提了质粒先和空载体一起跑电泳,大小不对直接pass。

挑了很多,但每次都是这样,请问你们挑了多少么,而且同实验室做别的基因没问题
3楼2015-11-24 18:22:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoblackdog at 2015-11-24 18:22:03
挑了很多,但每次都是这样,请问你们挑了多少么,而且同实验室做别的基因没问题...

我当时片段是8k多,检测了近两百个终于晒到了。差点就放弃了。
4楼2015-11-24 19:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +4 瞬息宇宙 2026-08-10 4/200 2026-08-11 02:02 by 旁观2020
[基金申请] 帮忙看看fileCode +4 wwncly 2026-08-10 8/400 2026-08-10 22:07 by demonstreets
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
请填处理意见