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Le悠悠

金虫 (初入文坛)

[求助] 做聚丙烯酰胺凝胶之后,条带一直不清楚是什么问题呢,要怎么解决呀?求助!求助!

请问做聚丙烯酰胺凝胶之后,条带一直不清楚是什么问题呢,要怎么解决呀?
PCR结果做琼脂糖凝胶是有条带的,但聚丙烯的效果一直不好,胶应该是没问题,因为mark跑的很好,分得很清晰,样品的就只是能看到有东西,但分不开,或是条带很细,颜色很浅,各位大神,给支支招呀!!!
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笑一笑,没什么大不了
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Le悠悠

金虫 (初入文坛)

错啦,是marker效果很好
笑一笑,没什么大不了
2楼2015-11-04 10:10:19
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浪遏飞州

新虫 (初入文坛)

看M没有问题,胶应该制的不错。
如果SDS-PAGE条带模糊不清,而PCR清晰。建议改善蛋白提取方法,注重改善量、质的问题。即使微量的dna或mrna都于pcr易于检测。如果方法没有问题,应该是样品处理有问题。蛋白量不足,本来就少,可能混有杂质,需仔细。本人意见粗陋,仅供参考。

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3楼2015-11-04 19:14:00
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liweiwaxmc

铜虫 (小有名气)

条带模糊和条带颜色浅是两回事!模糊可能是蛋白提取的质量不高,或者蛋白有降解,可以考虑蛋白提取试剂盒!如果是条带颜色浅,可能是蛋白量不足,可以增加上样量活着浓缩蛋白!一般样品量是30-40!

发自小木虫IOS客户端
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4楼2015-11-04 23:56:26
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Le悠悠

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 浪遏飞州 at 2015-11-04 19:14:00
看M没有问题,胶应该制的不错。
如果SDS-PAGE条带模糊不清,而PCR清晰。建议改善蛋白提取方法,注重改善量、质的问题。即使微量的dna或mrna都于pcr易于检测。如果方法没有问题,应该是样品处理有问题。蛋白量不足, ...

我们做的不是蛋白,做的是DNA分子标记呀

发自小木虫Android客户端
笑一笑,没什么大不了
5楼2015-11-05 08:30:23
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董小露

金虫 (小有名气)

小牛

我想问一下楼主,做DNA的不是都用琼脂糖么,为什么你用聚丙烯做啊,聚丙烯不是跑蛋白的 么
6楼2015-11-05 10:05:33
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Le悠悠

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 董小露 at 2015-11-05 10:05:33
我想问一下楼主,做DNA的不是都用琼脂糖么,为什么你用聚丙烯做啊,聚丙烯不是跑蛋白的 么

已经做了琼脂糖的啦,现在想做分子标记
笑一笑,没什么大不了
7楼2015-11-05 10:51:59
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