| 查看: 1024 | 回复: 5 | ||
[求助]
聚丙烯酰胺凝胶效果 已有2人参与
|
|
大神们帮帮忙呀，请问做聚丙烯酰胺凝胶之后，条带一直不清楚是什么问题呢，要怎么解决呀？PCR结果做琼脂糖凝胶是有条带的，但聚丙烯的效果一直不好 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有105人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有了解尿素变性的聚丙烯酰胺凝胶吗
已经有0人回复
- 做聚丙烯酰胺凝胶之后，条带一直不清楚是什么问题呢，要怎么解决呀？求助！求助！
已经有6人回复
- 关于聚丙烯酰胺水凝胶
已经有25人回复
- SSR聚丙烯酰胺凝胶电泳图分析
已经有1人回复
- SSR聚丙烯酰胺凝胶分析
已经有2人回复
- 高活性 多元石墨烯基 催化材料 聚丙烯酰胺3维凝胶结构 合成 表征 催化应用
已经有0人回复
- 为什么SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳跑出来老是一条线，没有条带（mark也跑不出来）
已经有26人回复
- 水凝胶可以做哪些应用
已经有13人回复
- DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染不显示带
已经有10人回复
- 凝胶色谱测定：降解后的聚丙烯酰胺的凝胶色谱图，麻烦看下哪个图的效果好呢？
已经有0人回复
- 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
已经有16人回复
- 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳电压方面的问题
已经有20人回复
- CRP的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
已经有6人回复
- 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时上样不加甲酰胺效果会如何？
已经有4人回复
- DNA凝胶回收方法及常见问题
已经有1人回复
- 跑完电泳后如何检测凝胶中蛋白质点的含量？诚盼各位生物高手指点。。。
已经有2人回复
- 【资料】做好电泳的关键技术及问题总结
已经有27人回复
- 【求助/交流】非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
已经有2人回复
- 【原创】非变性凝胶电泳原理及应用实例
已经有48人回复
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳制胶巧除气泡
已经有6人回复
2楼2015-11-05 08:58:44
3楼2015-11-05 09:45:16
恶魔的左眼
木虫 (正式写手)
- 应助: 110 (高中生)
- 金币: 2237.7
- 红花: 20
- 帖子: 425
- 在线: 880.6小时
- 虫号: 3705608
- 注册: 2015-03-03
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
目的蛋白质条带模糊可能不光是凝胶的问题，还可能存在以下情况： 1.电泳凝胶浓度选择不当。 2.低于10Kd的小分子蛋白质要用Tricine胶。 3.靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。 4.蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。 5.电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。 6.缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。 7.避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL（即2-10ug蛋白质）。 8.加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱里保存。 在蛋白表达与纯化上还有问题可以看看这个：SDS-PAGE常见问题解析 |
4楼2015-11-05 09:51:20
5楼2015-11-05 10:55:06
恶魔的左眼
木虫 (正式写手)
- 应助: 110 (高中生)
- 金币: 2237.7
- 红花: 20
- 帖子: 425
- 在线: 880.6小时
- 虫号: 3705608
- 注册: 2015-03-03
- 专业: 蛋白质组学
|
我去，看错了。。。你看看这个吧，DNA这块我很少接触的。。。 1)DNA 降解。避免核酸酶污染。 2)DNA 上样量过多。减少凝胶中 DNA 上样量。 3)电泳缓冲液陈旧: 电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低， pH 值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。 4)电泳条件不合适。电泳时电压不应超过 20V/cm ，温度＜30 ℃ ,巨大 DNA 链，温度应＜15 ℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。 5)DNA 样含盐过高。泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。 6)有蛋白污染。电泳前抽提去除蛋白。 7) DNA 变性。电泳前勿加热，用 20mM NaCl 缓冲液稀释 DNA 。 |
6楼2015-11-05 11:21:22
50