| 查看: 3669 | 回复: 7 | ||||
[求助]
EMSA看不见任何带，求助求助 已有1人参与
|
|
最近在做EMSA,自己以前没有做过啊，配置了以下试剂， Binding Buffer (store at -20℃) 10mM HEPES, 50 mM KCl, 1mM DTT 0.2mM, 0.05% NP-40, 10% glycerol, pH 7.4 配置非变性聚丙烯酰胺凝胶(以6％浓度为例) 5×TBE 1mL 30％Ac-Bi 2mL 40％Glycerin 625μl DDW 3.125Ml 10%AP 150μl 10%TEMED 100μl 以预冷为4℃的0.5×TBE为电泳缓冲液，100V预电泳30-60min 我的DNA是单链，5‘FAM标记，退火后加入Binding Buffer，细胞核蛋白孵育1h后加入6×Loading Buffer (TAKARA) 4μl，上样10－20μl，100V电泳至溴酚蓝于三分之二处。 但是结果如下图，没有条带，而后我又用不带标记的DNA与蛋白孵育以后进行EMSA，然后用EB染胶，发现DNA都在加样孔处，且呈现梯度增加（几个孔所加DNA含量相等，但是细胞核蛋白梯度增加）。下图由右至左：Marker,DNA,细胞核蛋白，之后的几个孔都是DNA+细胞核蛋白，且细胞核蛋白浓度增加。 有一个奇怪的现象就是Marker的孔下方也会有亮亮的弯曲的条带，不知道是什么东西？ 哪位大侠看看如何改进？万分感谢啊！实验就差这最后的一个实验了。。。。  dell 2013-12-04 14 时 44 分.JPG  dell 2013-12-04 14 时 42 分.JPG [ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 实验求助 |
» 猜你喜欢
DMXAA：从血管破坏剂到STING通路研究的关键工具分子 | Biochempartner
已经有0人回复
-
靶向PD-L1的人源化单克隆抗体阿特珠单抗
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有245人回复
-
"探针之父"(+)-JQ-1如何改变表观遗传研究 | Biochempartner
已经有0人回复
-
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- origin copy page 到 ppt中，然后把图打开但是看不见图？
已经有6人回复
- 【求助】为啥Pt/c催化剂用XRD看不见Pt的峰值？
已经有12人回复
yang0071
木虫 (职业作家)
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
- 在线: 647.7小时
- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-12-05 07:41:16
3楼2013-12-05 09:36:16
4楼2014-09-17 09:22:12
|
本帖内容被屏蔽 |
5楼2014-11-07 23:06:40
6楼2016-03-20 18:05:51
7楼2016-03-20 18:06:54
|
本帖内容被屏蔽 |
8楼2021-09-29 21:30:09