| 查看: 3830 | 回复: 7 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
EMSA看不见任何带，求助求助 已有1人参与
|
||||
|
最近在做EMSA,自己以前没有做过啊，配置了以下试剂， Binding Buffer (store at -20℃) 10mM HEPES, 50 mM KCl, 1mM DTT 0.2mM, 0.05% NP-40, 10% glycerol, pH 7.4 配置非变性聚丙烯酰胺凝胶(以6％浓度为例) 5×TBE 1mL 30％Ac-Bi 2mL 40％Glycerin 625μl DDW 3.125Ml 10%AP 150μl 10%TEMED 100μl 以预冷为4℃的0.5×TBE为电泳缓冲液，100V预电泳30-60min 我的DNA是单链，5‘FAM标记，退火后加入Binding Buffer，细胞核蛋白孵育1h后加入6×Loading Buffer (TAKARA) 4μl，上样10－20μl，100V电泳至溴酚蓝于三分之二处。 但是结果如下图，没有条带，而后我又用不带标记的DNA与蛋白孵育以后进行EMSA，然后用EB染胶，发现DNA都在加样孔处，且呈现梯度增加（几个孔所加DNA含量相等，但是细胞核蛋白梯度增加）。下图由右至左：Marker,DNA,细胞核蛋白，之后的几个孔都是DNA+细胞核蛋白，且细胞核蛋白浓度增加。 有一个奇怪的现象就是Marker的孔下方也会有亮亮的弯曲的条带，不知道是什么东西？ 哪位大侠看看如何改进？万分感谢啊！实验就差这最后的一个实验了。。。。  dell 2013-12-04 14 时 44 分.JPG  dell 2013-12-04 14 时 42 分.JPG [ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 实验求助 |
» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有252人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- origin copy page 到 ppt中，然后把图打开但是看不见图？
已经有6人回复
- 【求助】为啥Pt/c催化剂用XRD看不见Pt的峰值？
已经有12人回复
6楼2016-03-20 18:05:51
yang0071
木虫 (职业作家)
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
- 在线: 647.7小时
- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-12-05 07:41:16
3楼2013-12-05 09:36:16
4楼2014-09-17 09:22:12
