应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » EMSA看不见任何带，求助求助
51/1返回列表
查看: 3390  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sageyaya

新虫 (初入文坛)

[求助] EMSA看不见任何带，求助求助 已有1人参与

最近在做EMSA,自己以前没有做过啊，配置了以下试剂，
Binding Buffer (store at -20℃)
10mM     HEPES,     50 mM    KCl,         1mM      DTT     0.2mM, 0.05% NP-40,     10%      glycerol, pH 7.4
配置非变性聚丙烯酰胺凝胶(以6％浓度为例)
5×TBE                       1mL
30％Ac-Bi                    2mL
40％Glycerin                      625μl
DDW                            3.125Ml
10%AP                           150μl
10%TEMED                       100μl
以预冷为4℃的0.5×TBE为电泳缓冲液，100V预电泳30-60min

我的DNA是单链，5‘FAM标记，退火后加入Binding Buffer，细胞核蛋白孵育1h后加入6×Loading Buffer (TAKARA) 4μl，上样10－20μl，100V电泳至溴酚蓝于三分之二处。
但是结果如下图，没有条带，而后我又用不带标记的DNA与蛋白孵育以后进行EMSA，然后用EB染胶，发现DNA都在加样孔处，且呈现梯度增加（几个孔所加DNA含量相等，但是细胞核蛋白梯度增加）。下图由右至左：Marker,DNA,细胞核蛋白，之后的几个孔都是DNA+细胞核蛋白，且细胞核蛋白浓度增加。
有一个奇怪的现象就是Marker的孔下方也会有亮亮的弯曲的条带，不知道是什么东西？
哪位大侠看看如何改进？万分感谢啊！实验就差这最后的一个实验了。。。。
EMSA看不见任何带，求助求助
dell 2013-12-04 14 时 44 分.JPG


EMSA看不见任何带，求助求助-1
dell 2013-12-04 14 时 42 分.JPG

[ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 实验求助

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-04 16:57:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木桃夹子

禁虫
本帖内容被屏蔽
8楼2021-09-29 21:30:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是不是曝光过度了，
有2个小白点啊

找你老师买个试剂盒再做做看

。。。。。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-05 07:41:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sageyaya

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2013-12-05 07:41:16
你是不是曝光过度了，
有2个小白点啊

找你老师买个试剂盒再做做看

。。。。。

没有曝光过度，是我调的，能够看到在孔的地方有下边缘有亮的，传上来好像不是很明显了，试剂盒问了，由于我的是FAM标记的，没有找到能够用的试剂盒啊。。。。
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-05 09:36:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cc1000ml

金虫 (正式写手)
你好，不知道你最后做出来没?想请教一下你的6X的上样buffer是TAKARA的，货号能告诉我一下么
赞一下 回复此楼
徐无鬼
4楼2014-09-17 09:22:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +4 vv迷 2026-03-21 5/250 2026-03-22 08:38 by ChemPharm
[考研] 求调剂院校信息 +4 CX 330 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:48 by ms629
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 10/500 2026-03-19 14:31 by lemonzzn
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭