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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 聚丙烯酰胺凝胶之胶孔不凝
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萧洛晗

银虫 (正式写手)

[求助] 聚丙烯酰胺凝胶之胶孔不凝

如题，之前做得好好的，重新配了丙烯酰胺溶液和TBE之后就出问题了，还是按照原来的配方做的胶，本来这种气温下基本上5min就凝了，但这次做的40min了，胶孔那还是凝不了。想请教有经验的亲，怎么解决这个问题。
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自天佑之，吉无不利
1楼 2013-08-22 09:51:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
4楼: Originally posted by 忘性大啊 at 2013-08-22 10:16:33
（重新配了丙烯酰胺溶液和TBE之后）你这东西是自己配的。我都是买着用的，话说你确定TBE是用来跑PAGE胶的么。（TBE（Tris硼酸），是一种PCR技术中用到的缓冲液）这是同一个东西么。。

估计他这是跑EMSA或者Sequencing gel之类的,确实有用TBE的　
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2013-08-22 10:22:22
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普通回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)
重配
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-08-22 10:02:05
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-22 20:05:16
萧洛晗: 金币+5 2013-08-23 09:03:48
萧洛晗: 金币+3 2013-08-23 15:46:29
唔,APS是不是太旧了
胶孔最不容易凝固是因为最上面和空气中的氧气接触多,聚合反应被氧气中止了
有时候我会在加TEMED和APS前把溶液放到俺们实验室42度做转化的水浴里预热一下,热的聚合快
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2013-08-22 10:10:24
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忘性大啊

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-22 20:05:23
萧洛晗: 金币+2 2013-08-23 15:45:19
（重新配了丙烯酰胺溶液和TBE之后）你这东西是自己配的。我都是买着用的，话说你确定TBE是用来跑PAGE胶的么。（TBE（Tris硼酸），是一种PCR技术中用到的缓冲液）这是同一个东西么。。
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4楼2013-08-22 10:16:33
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萧洛晗

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-08-22 10:10:24
唔,APS是不是太旧了
胶孔最不容易凝固是因为最上面和空气中的氧气接触多,聚合反应被氧气中止了
有时候我会在加TEMED和APS前把溶液放到俺们实验室42度做转化的水浴里预热一下,热的聚合快

有可能，AP配了有两个月了，一直放在4℃。听同学说，他们那AP是现配现用的。
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自天佑之，吉无不利
6楼2013-08-22 10:45:47
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萧洛晗

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-08-22 10:02:05
重配

已经重配了TBE，还是不能凝胶，下午试剂到了再重配丙烯酰胺，看看能不能解决问题。话说，TBE可以高压吗？
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自天佑之，吉无不利
7楼2013-08-22 10:48:16
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萧洛晗

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 忘性大啊 at 2013-08-22 10:16:33
（重新配了丙烯酰胺溶液和TBE之后）你这东西是自己配的。我都是买着用的，话说你确定TBE是用来跑PAGE胶的么。（TBE（Tris硼酸），是一种PCR技术中用到的缓冲液）这是同一个东西么。。

可以买吗？我们这都是自己配的。我们这用TBE、丙烯酰胺、AP和TEMED配胶，然后跑PCR。和你说的应该是同一种东西。
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自天佑之，吉无不利
8楼2013-08-22 10:54:18
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萧洛晗

银虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-08-22 10:22:22
估计他这是跑EMSA或者Sequencing gel之类的,确实有用TBE的　...

嗯，主要是看一下变性后的ＤＮＡ单链有没有基因突变。
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自天佑之，吉无不利
9楼2013-08-22 10:56:42
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忘性大啊

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 萧洛晗 at 2013-08-22 10:54:18
可以买吗？我们这都是自己配的。我们这用TBE、丙烯酰胺、AP和TEMED配胶，然后跑PCR。和你说的应该是同一种东西。...

如果方便的话可以把制胶配方发给我看下么。yuanhebiaoda@163.com.谢谢
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10楼2013-08-22 11:47:44
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