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（木虫生物专题讨论）之核酸提取纯化专题贴
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———————————————————————————————— 继续招帖子工，招聘链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=910794&fpage=1 ——————————————————————————————————— 不才经过半个多月的整理，核酸提取纯化专题终于完成了。 本专题共分两篇 一为技巧篇 二为解惑篇 其中每篇分别整理成三章： DNA，RNA（含mRNA）和质粒。 请各位多多支持！ 如果你觉得你从中学到了一点东西， 就把它顶起来吧， 让更多的人从中获益~    [ Last edited by raindrop8316 on 2008-8-19 at 08:44 ] |
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 原创 | 关于RNA | 经验 | 音乐的梦 |
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II．解惑篇
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第一章 DNA提取与纯化 主题1：蚌的基因组DNA提取问题（拖尾严重） 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=888918&fpage=14 解答1：xyklmu 拖尾严重一般认为是所得的DNA有蛋白的污染，蛋白未抽提完全。 分子量大小小于1万bps，主要是酚氯仿抽提造成剪切所致。要想获得大分子量的genomic DNA，可以在蛋白酶K充分消化后，直接用异丙醇沉淀即可，不必经过酚氯仿抽提的步骤。这也得看你抽提DNA以后，用于什么目的了。如果仅仅是做pcr之类的，不必酚氯仿抽提。 主题2：DNA上样缓冲液各组分作用，原理 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=893542&fpage=15 解答1： 三磷酸腺苷 一般loadind buffer中的甘油、蔗糖都是辅助样品沉降的 因为样品太轻，在缓冲液中容易飘起来 所以需要一些重的东西包裹住，然后沉降下去 解答2：yujie8586 DNA用的6xloading buffer 含有色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)、二甲苯腈蓝FF（Xylene Cyanol FF)，可以观察电泳的进行情况。溴酚蓝在琼脂糖凝胶（0.5% ~ 1.4%）中约与300 bp的双链线状DNA的迁移速度相同（在0.5×TBE中)，而二甲苯腈蓝FF则与4 kbp的双链线状DNA的迁移速度相等。溴酚蓝与二甲苯腈蓝FF在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速率则随凝胶浓度的改变而不同。还有EDTA 和蔗醣。 解答3：xyklmu EDTA是DNAase的抑制剂，可以避免在电泳过程中DNAase的作用。 主题3：植物标本DNA提取，样品保鲜 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=882330&fpage=19 解答1：xueqiao1868 新鲜的最好,降解少! 怎么才能防止变焉???注意保水 采集时用冰袋,尽快提取 解答2：wyzl2007 最好的办法是将植物放入衣袋液氮罐中保存，只有有液氮就行 解答3：glenn_007 我的样品是采下来新鲜的叶片，用蒸馏水和乙醇擦拭表面清洁后，放入变色硅胶中快速干燥的。提取的效果挺好的。 或者用书压着效果也可以。 只要表面没有发黄，没有真菌和虫蛀，提取就没问题 解答4：xujian568 标本DNA的提取确实比较麻烦的，特别是老的标本，时间长了有时候就没有了，降解了，试试运气了，最好是用试剂盒。 保水的方法一般就是减少叶片的蒸腾，还有增加环境的湿度。 尽快提取。 解答5：ahhflhz 采集回来放-８０度冰箱保存就行了，没有超低温冰箱就放在-２０度冰箱， 采叶片的时候放在冰盒里或者液氮里就可以了 主题4：酒精浸泡的昆虫标本DNA 提取 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=884772&fpage=19 解答1：bioplant 乙醇具有沉淀DNA的作用，会不会提取时，沉淀的DNA在第一次裂解离心时丢弃啦。 常规试剂盒也是用普通试剂，所以有时自己配制的试剂因为新鲜，提取效果更好。 解答2： 三磷酸腺苷 估计是乙醇没有挥发干就拿去提 核酸纯化做得很好的公司是QIAGEN，要不你联系他们的技术支持看看有没有合适的试剂盒 主题5：DNA电泳(在100bp处有很宽，很亮的一堆东西，这是什么啊) 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=901836&fpage=1 解答1：11014612 是RNA 解答2：helenfang 在DNA提取过程中RNA很容易被降解，所以我想下面那些应该是降解的RNA碎片吧 解答3：snzydong 破碎的DNA片段 解答4：yelitao1983 我想应该是RNA而不是DNA破碎的小片段！本人提过N次植物基因组了！如果提取过程中DNA断裂的话，应该是一长串弥散的带，不应该只在100bp处有带！如果你非要弄明白是不是RNA，向提出的基因组DNA中加RNA酶再泡电泳验证一下就可以了！ 解答5：xiaochong0101 （楼主） 证实应该是RNA，因为加了RNA酶之后明显减少了 |
6楼2008-08-15 17:21:22
I．技巧篇
2楼2008-08-15 17:13:35
3楼2008-08-15 17:15:07
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第三章 质粒提取与纯化 主题1：质粒DNA的分离纯化和鉴定 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=142066&fpage=418 发帖人：okaysee 主题2：一步法提取质粒DNA 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=202040&fpage=398 发帖人：aronxu 主题3：质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=417117&fpage=295 发帖人：raoqun20 主题4：质粒DNA提取试验常见问题解答 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=462010&fpage=270 发帖人：beingking 主题5：质粒DNA的分离、纯化和鉴定 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=543443&fpage=219 发帖人：lgj7966 主题6：转一篇关于质粒DNA提取原理的很棒的文章 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=772205&fpage=71 发帖人：wjswj 以下为付费下载部分 主题7：质粒DNA的提取及浓度检测 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=595213&fpage=189 发帖人：applepie119 主题8：质粒快速提取试剂盒 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=595209&fpage=189 发帖人：applepie119 主题9：质粒DNA的提取和纯化 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=102712&fpage=429 发帖人：pzhangyh 主题10：质粒提取简介及问题分析 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=666139&fpage=141 发帖人：yangym1123 |
4楼2008-08-15 17:17:49