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（木虫生物专题讨论）之核酸提取纯化专题贴
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———————————————————————————————— 继续招帖子工，招聘链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=910794&fpage=1 ——————————————————————————————————— 不才经过半个多月的整理，核酸提取纯化专题终于完成了。 本专题共分两篇 一为技巧篇 二为解惑篇 其中每篇分别整理成三章： DNA，RNA（含mRNA）和质粒。 请各位多多支持！ 如果你觉得你从中学到了一点东西， 就把它顶起来吧， 让更多的人从中获益~    [ Last edited by raindrop8316 on 2008-8-19 at 08:44 ] |
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 原创 | 关于RNA | 经验 | 音乐的梦 |
| 实验相关 |
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第三章 质粒提取与纯化 主题1：提取质粒时为什么总是有总DNA？ 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=617672&fpage=175 解答1：jiasanlin 如果是碱裂解发提取质粒的时候，一般裂解时间长的化就会混入genome DNA,一般情况下加入溶液2后只要看到菌液清亮，就要马上加入溶液3 终止。变清亮的时间跟收集菌体的量和溶液2的用量有关，分子克隆手册上的不要超过5分钟，只是一个大概的时间。 解答2：guohuayin 前三步越快越好，并且动作一定要轻柔，不然会造成大量的基因组DNA断裂。 解答3：angelina-wl 加溶液2后动作要轻柔,也要快.不然会打断总DNA,在电泳检测时在靠近口的地方就能看见. 解答4： 随风而过 实在没办法，你就跑个电泳切胶回收质粒，质粒的分子量你应该知道吧。提取质粒的时候加容易2的时候要轻柔，最好只是轻轻的颠倒几次就行，千万不要用涡旋混匀器，否则动作大了就会打断总DNA的 主题2：如何抽提较大的质粒 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=400060&fpage=160 解答1：wwwkkk83 超纯度大型质粒的抽提试剂盒 专门用于纯化小于250kb的BAC、PAC、P1或粘粒DNA，可彻底去除基因组DNA的污染。 货名 规格 货号 价格 QIAGEN large-Construct Kit 10perps 12462 4338 解答2：轻5飞扬 质粒大,所以拷贝会少自然提出的也少,用碱法提应该可以,多集些菌,然后蛋白那部多抽些应该会好些,最后消化时间也略长些吧,2h可以试一下 解答3： 随风而逝 减法抽提的量确实比较大，我们实验室都是用这种方法抽30000左右的大质粒的。你的量比较少可能有以下几个问题： 1. 大质粒不能保菌，每次都要转化质粒，调斑。剩余的部分菌液，赶在第二天前大扩。千分之一加菌液，青霉素千分之一稍小些。 2. 摇菌时间保证十二小时，时间稍长，大质粒会迅速消失 主题3:如果提取这种菌的质粒和RNA (洋葱伯克氏菌，G- 细菌) 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=725282&fpage=115 无解答 主题4：质粒提取结果两条带是为什么（疑为基因组DNA） 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=767741&fpage=87 解答1：lauren180 延长碱变性时间 解答2：yuanzhiqin.119 试试在提取液上想想办法，本质跟延长时间是一样的 解答3：linfeng196 我觉得有三种可能，一是细菌基因组的污染，解决的办法是加入溶液II的时候操作要轻柔，不要剧烈，还要控制时间，二可能是你的质粒的状态不好，如果你的质粒状态好的话，大多数应该以超螺旋形式存在，而你的都是线性的，没有超螺旋的，所以那个可能是开环状态的质粒，我觉得第二种可能性更大些 。第三种可能是已经发生了质粒的整合 主题5：质粒电泳求助（没有条带) 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=780570&fpage=79 解答1：xxh8372 是不是上样有些少啊？ 解答2： 十比 应该以电泳为准，分光光度计不准的。可能质粒提得有问题 主题5：质粒提不出来？ （保存的菌种在AMP中可见长，但质粒提不出） 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=876309&fpage=30 解答1：jasco 菌液划线，挑单菌落，再液体培养重新抽质粒 解答2：duanyongzhong 可能是你的菌种已经被污染了，在这种情况下，菌体内含有amp抗性基因，但并没有质粒的存在，所以你提不到质粒，我考虑是这种原因。检验你的受体菌是否被污染。 [ Last edited by raindrop8316 on 2008-8-19 at 08:47 ] |
16楼2008-08-15 17:34:06
I．技巧篇
2楼2008-08-15 17:13:35
3楼2008-08-15 17:15:07
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第三章 质粒提取与纯化 主题1：质粒DNA的分离纯化和鉴定 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=142066&fpage=418 发帖人：okaysee 主题2：一步法提取质粒DNA 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=202040&fpage=398 发帖人：aronxu 主题3：质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=417117&fpage=295 发帖人：raoqun20 主题4：质粒DNA提取试验常见问题解答 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=462010&fpage=270 发帖人：beingking 主题5：质粒DNA的分离、纯化和鉴定 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=543443&fpage=219 发帖人：lgj7966 主题6：转一篇关于质粒DNA提取原理的很棒的文章 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=772205&fpage=71 发帖人：wjswj 以下为付费下载部分 主题7：质粒DNA的提取及浓度检测 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=595213&fpage=189 发帖人：applepie119 主题8：质粒快速提取试剂盒 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=595209&fpage=189 发帖人：applepie119 主题9：质粒DNA的提取和纯化 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=102712&fpage=429 发帖人：pzhangyh 主题10：质粒提取简介及问题分析 链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=666139&fpage=141 发帖人：yangym1123 |
4楼2008-08-15 17:17:49