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情毒之殇

金虫 (正式写手)

你可以考虑增加诱导之前的OD值,但是也不能太高,高了本底表达也高了。尽量低温、低浓度、长时间诱导,这样能促进蛋白的溶解
我们的心是荒野还是沃土?!
21楼2015-08-05 10:39:46
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 生物小猴子呢 at 2015-08-04 14:45:57
你可以从IPTG的浓度、诱导的温度、诱导的转速以及诱导时间等条件进行摸索,IPTG浓度过高会使得包涵体含量增加,BL21是大肠杆菌,最适温度37℃,但是建议往下降温度,温度过高合成蛋白速率过快就有可能造成目的蛋白来 ...

哦,听的你的建议,明白IPTG浓度的作用,可不可以在IPTG浓度高的时候先试试蛋白有没有表达,然后再下降浓度看看能不能可溶性表达呢,还有在最始温度先试试效果如何?再调低温度呢!不知道你的建议如何?
下雨天就算没有伞,我也要学会努力奔跑!
22楼2015-09-06 15:39:30
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13153014358

新虫 (初入文坛)

请问楼主的带GST标签的蛋白纯化出来了吗。。。我最近也一直在纯化GST标签的蛋白,等着测酶活,250ml的菌体,0.3mMIPTG,30度诱导4小时,超声破碎,最后纯化出来的浓度一直特别低....目的蛋白大小在50多KDa,加上GST标签大约在接近80KDa...如果楼主纯化的效果比较好,可否介绍点经验。。。
23楼2016-05-12 20:23:38
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
23楼: Originally posted by 13153014358 at 2016-05-12 20:23:38
请问楼主的带GST标签的蛋白纯化出来了吗。。。我最近也一直在纯化GST标签的蛋白,等着测酶活,250ml的菌体,0.3mMIPTG,30度诱导4小时,超声破碎,最后纯化出来的浓度一直特别低....目的蛋白大小在50多KDa,加上GST标 ...

我最后纯化的量也很少啊,没有摸到特别好的条件

发自小木虫IOS客户端
24楼2016-05-13 07:53:49
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jackyoung

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by ksws0465326 at 2015-08-03 20:13:41
像楼上说的,不知道楼主摇菌转速多少,太快也不好,我们实验室常用170rpm,我也做过几次BL21的GST蛋白提取,加的时0.4mM的IPTG,30度3小时,回收量还不错,还有,根据培养基的组成不同,也会很大程度的影响蛋白产生 ...

能不能讲讲这么做的原理?

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
25楼2016-05-13 08:53:22
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戈馥

新虫 (初入文坛)

楼主   问题解决了吗?
求助......
26楼2017-04-11 11:03:08
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