24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 11222.4
散金: 158
红花: 1
帖子: 720
在线: 122.4小时
虫号: 2144809
注册: 2012-11-24
专业: 昆虫学

[求助] 怎样提高融合蛋白表达量已有6人参与

在BL21菌株中诱导表达蛋白，用的是GST标签，做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少，挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀（包涵体）蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜，但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了，上清沉淀都少，该怎么解决呢？最后蛋白是要用来测酶活的，所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助！

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

对转基因的困惑----核酸代谢,经济利益,科学文化(转载) 已经有0人回复

1楼 2015-08-02 19:49:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

生物小猴子呢

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
帖子: 1
在线: 1.3小时
虫号: 3745238
注册: 2015-03-17

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

你可以从IPTG的浓度、诱导的温度、诱导的转速以及诱导时间等条件进行摸索，IPTG浓度过高会使得包涵体含量增加，BL21是大肠杆菌，最适温度37℃，但是建议往下降温度，温度过高合成蛋白速率过快就有可能造成目的蛋白来不及正确折叠因而大部分形成包涵体，诱导转速过快也是是一样。本人也是刚开始做，一点点小经验可以参考一下。有时候你可以试着换换载体或者宿主细胞，表达量也会不同。我用过Transtta(DE3) 感受态细胞，表达量会比BL21高，只是我个人这样，你可以试试。