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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 怎样提高融合蛋白表达量
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 怎样提高融合蛋白表达量 已有6人参与

在BL21菌株中诱导表达蛋白，用的是GST标签，做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少，挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀（包涵体）蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜，但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了，上清沉淀都少，该怎么解决呢？最后蛋白是要用来测酶活的，所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助！
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1楼 2015-08-02 19:49:25
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生物小猴子呢

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以从IPTG的浓度、诱导的温度、诱导的转速以及诱导时间等条件进行摸索，IPTG浓度过高会使得包涵体含量增加，BL21是大肠杆菌，最适温度37℃，但是建议往下降温度，温度过高合成蛋白速率过快就有可能造成目的蛋白来不及正确折叠因而大部分形成包涵体，诱导转速过快也是是一样。本人也是刚开始做，一点点小经验可以参考一下。有时候你可以试着换换载体或者宿主细胞，表达量也会不同。我用过Transtta(DE3) 感受态细胞，表达量会比BL21高，只是我个人这样，你可以试试。
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10楼2015-08-04 14:45:57
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wufeng1991

新虫 (小有名气)
把iptg改回来不就行了，加到1mM

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-08-02 21:32:35
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wufeng1991 at 2015-08-02 21:32:35
把iptg改回来不就行了，加到1mM

可是IPTG浓度大了不是更容易形成包涵体吗？第一次用0.5mM的时候就很多包涵体，上清里面很少。
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3楼2015-08-03 08:40:19
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wufeng1991

新虫 (小有名气)
个人感觉gst促溶能力并不是很好，不如pet32a和sumo,mbp

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-08-03 13:11:46
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