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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 怎样提高融合蛋白表达量 已有6人参与

在BL21菌株中诱导表达蛋白,用的是GST标签,做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少,挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀(包涵体)蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜,但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了,上清沉淀都少,该怎么解决呢?最后蛋白是要用来测酶活的,所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助!
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情毒之殇

金虫 (正式写手)

你可以考虑增加诱导之前的OD值,但是也不能太高,高了本底表达也高了。尽量低温、低浓度、长时间诱导,这样能促进蛋白的溶解
我们的心是荒野还是沃土?!
21楼2015-08-05 10:39:46
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