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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 怎样提高融合蛋白表达量
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 怎样提高融合蛋白表达量 已有6人参与

在BL21菌株中诱导表达蛋白，用的是GST标签，做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少，挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀（包涵体）蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜，但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了，上清沉淀都少，该怎么解决呢？最后蛋白是要用来测酶活的，所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助！
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1楼 2015-08-02 19:49:25
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13153014358

新虫 (初入文坛)
请问楼主的带GST标签的蛋白纯化出来了吗。。。我最近也一直在纯化GST标签的蛋白，等着测酶活，250ml的菌体，0.3mMIPTG,30度诱导4小时，超声破碎，最后纯化出来的浓度一直特别低....目的蛋白大小在50多KDa,加上GST标签大约在接近80KDa...如果楼主纯化的效果比较好，可否介绍点经验。。。
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23楼2016-05-12 20:23:38
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wufeng1991

新虫 (小有名气)
把iptg改回来不就行了，加到1mM

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-08-02 21:32:35
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wufeng1991 at 2015-08-02 21:32:35
把iptg改回来不就行了，加到1mM

可是IPTG浓度大了不是更容易形成包涵体吗？第一次用0.5mM的时候就很多包涵体，上清里面很少。
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3楼2015-08-03 08:40:19
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wufeng1991

新虫 (小有名气)
个人感觉gst促溶能力并不是很好，不如pet32a和sumo,mbp

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-08-03 13:11:46
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