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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 怎样提高融合蛋白表达量 已有6人参与

在BL21菌株中诱导表达蛋白,用的是GST标签,做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少,挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀(包涵体)蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜,但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了,上清沉淀都少,该怎么解决呢?最后蛋白是要用来测酶活的,所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助!
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jackyoung

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by ksws0465326 at 2015-08-03 20:13:41
像楼上说的,不知道楼主摇菌转速多少,太快也不好,我们实验室常用170rpm,我也做过几次BL21的GST蛋白提取,加的时0.4mM的IPTG,30度3小时,回收量还不错,还有,根据培养基的组成不同,也会很大程度的影响蛋白产生 ...

能不能讲讲这么做的原理?

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
25楼2016-05-13 08:53:22
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