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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 怎样提高融合蛋白表达量
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 怎样提高融合蛋白表达量 已有6人参与

在BL21菌株中诱导表达蛋白，用的是GST标签，做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少，挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀（包涵体）蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜，但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了，上清沉淀都少，该怎么解决呢？最后蛋白是要用来测酶活的，所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助！
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1楼 2015-08-02 19:49:25
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wuwenmei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 生物小猴子呢 at 2015-08-04 14:45:57
你可以从IPTG的浓度、诱导的温度、诱导的转速以及诱导时间等条件进行摸索，IPTG浓度过高会使得包涵体含量增加，BL21是大肠杆菌，最适温度37℃，但是建议往下降温度，温度过高合成蛋白速率过快就有可能造成目的蛋白来 ...

哦，听的你的建议，明白IPTG浓度的作用，可不可以在IPTG浓度高的时候先试试蛋白有没有表达，然后再下降浓度看看能不能可溶性表达呢，还有在最始温度先试试效果如何？再调低温度呢！不知道你的建议如何？
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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
22楼2015-09-06 15:39:30
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wufeng1991

新虫 (小有名气)
把iptg改回来不就行了，加到1mM

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-08-02 21:32:35
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wufeng1991 at 2015-08-02 21:32:35
把iptg改回来不就行了，加到1mM

可是IPTG浓度大了不是更容易形成包涵体吗？第一次用0.5mM的时候就很多包涵体，上清里面很少。
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3楼2015-08-03 08:40:19
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wufeng1991

新虫 (小有名气)
个人感觉gst促溶能力并不是很好，不如pet32a和sumo,mbp

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-08-03 13:11:46
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