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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 怎样提高融合蛋白表达量 已有6人参与

在BL21菌株中诱导表达蛋白,用的是GST标签,做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少,挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀(包涵体)蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜,但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了,上清沉淀都少,该怎么解决呢?最后蛋白是要用来测酶活的,所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助!
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 生物小猴子呢 at 2015-08-04 14:45:57
你可以从IPTG的浓度、诱导的温度、诱导的转速以及诱导时间等条件进行摸索,IPTG浓度过高会使得包涵体含量增加,BL21是大肠杆菌,最适温度37℃,但是建议往下降温度,温度过高合成蛋白速率过快就有可能造成目的蛋白来 ...

哦,听的你的建议,明白IPTG浓度的作用,可不可以在IPTG浓度高的时候先试试蛋白有没有表达,然后再下降浓度看看能不能可溶性表达呢,还有在最始温度先试试效果如何?再调低温度呢!不知道你的建议如何?
下雨天就算没有伞,我也要学会努力奔跑!
22楼2015-09-06 15:39:30
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