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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 怎样提高融合蛋白表达量 已有6人参与

在BL21菌株中诱导表达蛋白,用的是GST标签,做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少,挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀(包涵体)蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜,但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了,上清沉淀都少,该怎么解决呢?最后蛋白是要用来测酶活的,所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助!
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
23楼: Originally posted by 13153014358 at 2016-05-12 20:23:38
请问楼主的带GST标签的蛋白纯化出来了吗。。。我最近也一直在纯化GST标签的蛋白,等着测酶活,250ml的菌体,0.3mMIPTG,30度诱导4小时,超声破碎,最后纯化出来的浓度一直特别低....目的蛋白大小在50多KDa,加上GST标 ...

我最后纯化的量也很少啊,没有摸到特别好的条件

发自小木虫IOS客户端
24楼2016-05-13 07:53:49
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wufeng1991

新虫 (小有名气)

把iptg改回来不就行了,加到1mM

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2015-08-02 21:32:35
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wufeng1991 at 2015-08-02 21:32:35
把iptg改回来不就行了,加到1mM

可是IPTG浓度大了不是更容易形成包涵体吗?第一次用0.5mM的时候就很多包涵体,上清里面很少。
3楼2015-08-03 08:40:19
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wufeng1991

新虫 (小有名气)

个人感觉gst促溶能力并不是很好,不如pet32a和sumo,mbp

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2015-08-03 13:11:46
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