应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 怎样提高融合蛋白表达量
262/3返回列表上一页123下一页
查看: 3595  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wufeng1991 at 2015-08-03 13:11:46
个人感觉gst促溶能力并不是很好，不如pet32a和sumo,mbp

我看32a的图谱含有His,S, Trx三种标签，请问你一般用哪种？
赞一下 回复此楼
11楼2015-08-04 14:48:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 生物小猴子呢 at 2015-08-04 14:45:57
你可以从IPTG的浓度、诱导的温度、诱导的转速以及诱导时间等条件进行摸索，IPTG浓度过高会使得包涵体含量增加，BL21是大肠杆菌，最适温度37℃，但是建议往下降温度，温度过高合成蛋白速率过快就有可能造成目的蛋白来 ...

我诱导一般16度过夜，温度已经挺低了。请问Transtta(DE3)细胞表达的蛋白可溶性怎样呢？
赞一下 回复此楼
12楼2015-08-04 14:53:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以如楼上所说的更换载体和宿主细胞来试试。不同的载体对是否在上清表达可能有很大影响。你可以试试MBP标签或SUMO标签。或是试试Transtta(DE3) 表达菌株等等。做蛋白表达有时是可能要试很多才有可能得到自己想要的结果。
赞一下 回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
13楼2015-08-04 15:23:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wufeng1991

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by weizhi111 at 2015-08-04 14:48:02
我看32a的图谱含有His,S, Trx三种标签，请问你一般用哪种？...

trxa是促溶的，另外两种是用来纯化的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2015-08-04 20:24:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
bl21并非全能表达系统 尤其是一些分子量较大的真核蛋白 在表达时容易形成包涵体 调整诱导表达条件确实能够提高可溶性表达 但程度有限 可以尝试更换表达系统

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
15楼2015-08-05 07:20:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by wufeng1991 at 2015-08-04 20:24:44
trxa是促溶的，另外两种是用来纯化的
...

哦，原来是这样。谢谢，我试试。
赞一下 回复此楼
16楼2015-08-05 07:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by whb21 at 2015-08-05 07:20:12
bl21并非全能表达系统 尤其是一些分子量较大的真核蛋白 在表达时容易形成包涵体 调整诱导表达条件确实能够提高可溶性表达 但程度有限 可以尝试更换表达系统

我的蛋白也不大啊，就30多KD。
赞一下 回复此楼
17楼2015-08-05 07:56:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ksws0465326 at 2015-08-03 20:13:41
像楼上说的，不知道楼主摇菌转速多少，太快也不好，我们实验室常用170rpm，我也做过几次BL21的GST蛋白提取，加的时0.4mM的IPTG，30度3小时，回收量还不错，还有，根据培养基的组成不同，也会很大程度的影响蛋白产生 ...

请问你破菌时超声一般用什么条件？
赞一下 回复此楼
18楼2015-08-05 07:57:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cs冰凝 at 2015-08-03 18:56:24
通过变性再复性，这样酶活也可以保证！不知你破菌是用超声还是高压破碎机？

请问你破菌时用什么条件？
赞一下 回复此楼
19楼2015-08-05 07:58:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by weizhi111 at 2015-08-05 07:57:51
请问你破菌时超声一般用什么条件？...

我做的时候，是这样，50ml培养基，菌摇起来OD600 在0.4-0.8后先取出4ml作为Pre－IPTG control，然后剩余的加入IPTG，继续培养，然后回收Past-IPTG sample，离心去上清，加入buffer进行破碎，control加300微 buffer，sample加600微，超声破碎条件是冰上操作，control 5sec/回，sample 10sec/回，间隔10-20sec，8回破碎，然后回收。我回收TBP也是30KD左右，效率还行，就是不知道是否适用于楼主的蛋白了
赞一下(2人) 回复此楼
20楼2015-08-05 08:29:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weizhi111 的主题更新
262/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +3 Mr. Z 2026-03-25 3/150 2026-03-25 15:06 by Linda Hu
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 303求调剂 +6 元夕元 2026-03-20 7/350 2026-03-25 12:00 by edmund7
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 3/150 2026-03-25 10:45 by hxsm
[考研] 07化学280分求调剂 +7 722865 2026-03-23 7/350 2026-03-25 09:29 by aa331100
[考研] 材料292调剂 +8 橘颂思美人 2026-03-23 8/400 2026-03-24 16:33 by laoshidan
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +3 SYA！ 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 求调剂材料学硕080500，总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 352求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123！
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭