| 查看: 3432 | 回复: 25 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
weizhi111至尊木虫 (正式写手)
|
[求助]
怎样提高融合蛋白表达量 已有6人参与
|
||
| 在BL21菌株中诱导表达蛋白，用的是GST标签，做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少，挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀（包涵体）蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜，但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了，上清沉淀都少，该怎么解决呢？最后蛋白是要用来测酶活的，所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化鉴定精华 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有89人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 对转基因的困惑----核酸代谢,经济利益,科学文化(转载)
已经有0人回复
ksws0465326
金虫 (小有名气)
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 885.4
- 红花: 6
- 帖子: 124
- 在线: 74.5小时
- 虫号: 3263751
- 注册: 2014-06-09
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
weizhi111: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-08-04 14:44:17
weizhi111: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-05 07:57:09
感谢参与，应助指数 +1
weizhi111: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-08-04 14:44:17
weizhi111: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-05 07:57:09
| 像楼上说的，不知道楼主摇菌转速多少，太快也不好，我们实验室常用170rpm，我也做过几次BL21的GST蛋白提取，加的时0.4mM的IPTG，30度3小时，回收量还不错，还有，根据培养基的组成不同，也会很大程度的影响蛋白产生量，比如，我回收TBP的时候，起初，用的培养基是Tryptone or polypeptone 5g，NaCl 1.25 g，NH4Cl 0.5g，KH2PO4 1.5g，Na2HPO412H2O 4.01g，up to 500ml, 取50ml培养回收，这时效率，上清大概是沉淀的50%（上清含量少），而后，我将培养基改成NaCl 0.5 g，NH4Cl 1g，KH2PO4 3g，Na2HPO412H2O 15g，up to 500ml；用时另外加入：1M MgSO4 1ml，2M Glucose 5.6ml，1% Vitamin B1(thiamine) 1ml，1M CaCl2 0.1ml。取50ml培养回收，反应条件30度2-4小时 OD600:0.4～0.8后加入IPTG，之后16度 24小时，回收TBP效率提高一倍。当然这也只是我做的个例，不能保证适用于所有的蛋白，仅供楼主参考，可以考虑改变下培养基成分，祝楼主早日解决问题。 |
7楼2015-08-03 20:13:41
ksws0465326
金虫 (小有名气)
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 885.4
- 红花: 6
- 帖子: 124
- 在线: 74.5小时
- 虫号: 3263751
- 注册: 2014-06-09
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
20楼2015-08-05 08:29:55