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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 怎样提高融合蛋白表达量 已有6人参与

在BL21菌株中诱导表达蛋白,用的是GST标签,做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少,挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀(包涵体)蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜,但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了,上清沉淀都少,该怎么解决呢?最后蛋白是要用来测酶活的,所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助!
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以如楼上所说的更换载体和宿主细胞来试试。不同的载体对是否在上清表达可能有很大影响。你可以试试MBP标签或SUMO标签。或是试试Transtta(DE3) 表达菌株等等。做蛋白表达有时是可能要试很多才有可能得到自己想要的结果。
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
13楼2015-08-04 15:23:32
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