应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取为什么浓度不高
191/2返回列表12下一页
查看: 4447  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dd812007135

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取为什么浓度不高 已有10人参与

我是用Endo-free plasmid Mini KitⅡ抽取质粒的，用了50ml的培养液过夜培养大肠杆菌，第二天抽取后发现浓度只有60ng/ml,浓度低的原因到底是什么呢？
第一次离心后发现菌体沉淀很多，我就把SOlution1,solution2 加大了一倍，这样可以吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-29 20:57:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

linglingys

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

本人之前也是抽提浓度低，后来换种感受态就OK了
赞一下(2人) 回复此楼
16楼2015-08-02 20:08:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxfeffie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dd812007135: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-04 12:17:42
你们三个人都是这种情况的话，我建议换一换菌种吧。我之前提取高拷贝的T载体时也偶尔会很低，只有几十ng，重新转化新菌种在提取就好了。
赞一下(2人) 回复此楼
18楼2015-08-03 15:36:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-30 23:23:50
dd812007135: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-07-31 10:52:40
你提的浓度太低啦，我最高提过1000ng/ul，也是Endo-Free,你是不是把试剂加错了，再仔细检查一下protol
赞一下(1人) 回复此楼
啊
4楼2015-07-30 19:58:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dd812007135

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 哎呀那个雨 at 2015-07-30 19:58:18
你提的浓度太低啦，我最高提过1000ng/ul，也是Endo-Free,你是不是把试剂加错了，再仔细检查一下protol

你说的这个试剂加错了不可能，我们是三个人同时做这个，量都是很低，不知道是不是我们菌液量加小了还是菌液失活了？今天我们用另外一个试剂盒做还是很低
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2015-07-31 10:56:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

表弟爱网游

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你的菌是低拷贝，可以尝试分5管提，最后加水溶解过滤膜上的质粒时，只第一管加水，把第一管离心下来的水加入到第二管，在加入到第三管，依次下去，浓度会很高。加水一定要加到膜上面溶解。我没用过你这种试剂盒，具体情况不太清楚。我以前用都是国产的柱子提的。低拷贝质粒就5到8管合成一管，浓度都足够了。
赞一下(1人) 回复此楼
当一切如飞舞的落叶坠落，惋惜之余，也要学会原谅与释怀
12楼2015-08-02 04:27:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带壳的鸡蛋

金虫 (小有名气)
最后那步加的量减少，不按照建议的来。
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2015-08-02 17:34:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
三个溶液都加大一倍，没有问题

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
借口很贱，，，
2楼2015-07-29 21:45:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dd812007135

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jonew at 2015-07-29 21:45:10
三个溶液都加大一倍，没有问题

如果裂解液加大一倍，是不是后续步骤的试剂也要加大一倍
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-29 22:48:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dd812007135

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 哎呀那个雨 at 2015-07-30 19:58:18
你提的浓度太低啦，我最高提过1000ng/ul，也是Endo-Free,你是不是把试剂加错了，再仔细检查一下protol

不知道是不是大肠杆菌里面的这个质粒是低拷贝，我每次培养大肠杆菌都是一下培养20ml,这个会不会太多呢？
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-31 10:52:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
dd812007135(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-02 22:21:07
试剂盒吸附柱的吸附能力一般是有限的，一般情况下浓度不会太高。当然你的60ng/ml的浓度的确太低了。。。
赞一下 回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
7楼2015-08-01 08:51:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wufeng1991

新虫 (小有名气)
是什么质粒呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
8楼2015-08-01 09:24:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengjunchen

铜虫 (小有名气)
测了od600没？离心沉淀下来的的菌多不？怕是没摇起来……这浓度也太低了。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
9楼2015-08-01 09:37:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupo44

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定是高拷贝数质粒么，用的哪个菌克隆

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2015-08-01 09:48:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dd812007135 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 大家玩filecode，现在的申请与受理打不开了 +3 dcqxinyang 2026-08-14 6/300 2026-08-14 18:03 by 690092147
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +5 Tide man 2026-08-14 6/300 2026-08-14 17:26 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +4 Ldrop2023 2026-08-13 4/200 2026-08-14 14:50 by Tide man
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭