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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取为什么浓度不高
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dd812007135

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取为什么浓度不高 已有10人参与

我是用Endo-free plasmid Mini KitⅡ抽取质粒的，用了50ml的培养液过夜培养大肠杆菌，第二天抽取后发现浓度只有60ng/ml,浓度低的原因到底是什么呢？
第一次离心后发现菌体沉淀很多，我就把SOlution1,solution2 加大了一倍，这样可以吗？
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1楼 2015-07-29 20:57:34
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

linglingys

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

本人之前也是抽提浓度低，后来换种感受态就OK了
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16楼2015-08-02 20:08:31
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zxfeffie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dd812007135: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-04 12:17:42
你们三个人都是这种情况的话，我建议换一换菌种吧。我之前提取高拷贝的T载体时也偶尔会很低，只有几十ng，重新转化新菌种在提取就好了。
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18楼2015-08-03 15:36:10
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-30 23:23:50
dd812007135: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-07-31 10:52:40
你提的浓度太低啦，我最高提过1000ng/ul，也是Endo-Free,你是不是把试剂加错了，再仔细检查一下protol
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啊
4楼2015-07-30 19:58:18
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dd812007135

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 哎呀那个雨 at 2015-07-30 19:58:18
你提的浓度太低啦，我最高提过1000ng/ul，也是Endo-Free,你是不是把试剂加错了，再仔细检查一下protol

你说的这个试剂加错了不可能，我们是三个人同时做这个，量都是很低，不知道是不是我们菌液量加小了还是菌液失活了？今天我们用另外一个试剂盒做还是很低
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6楼2015-07-31 10:56:01
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你的菌是低拷贝，可以尝试分5管提，最后加水溶解过滤膜上的质粒时，只第一管加水，把第一管离心下来的水加入到第二管，在加入到第三管，依次下去，浓度会很高。加水一定要加到膜上面溶解。我没用过你这种试剂盒，具体情况不太清楚。我以前用都是国产的柱子提的。低拷贝质粒就5到8管合成一管，浓度都足够了。
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当一切如飞舞的落叶坠落，惋惜之余，也要学会原谅与释怀
12楼2015-08-02 04:27:52
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带壳的鸡蛋

金虫 (小有名气)
最后那步加的量减少，不按照建议的来。
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15楼2015-08-02 17:34:18
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普通回帖

jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
三个溶液都加大一倍，没有问题

[ 发自小木虫客户端 ]
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借口很贱，，，
2楼2015-07-29 21:45:10
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dd812007135

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jonew at 2015-07-29 21:45:10
三个溶液都加大一倍，没有问题

如果裂解液加大一倍，是不是后续步骤的试剂也要加大一倍
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3楼2015-07-29 22:48:06
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dd812007135

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 哎呀那个雨 at 2015-07-30 19:58:18
你提的浓度太低啦，我最高提过1000ng/ul，也是Endo-Free,你是不是把试剂加错了，再仔细检查一下protol

不知道是不是大肠杆菌里面的这个质粒是低拷贝，我每次培养大肠杆菌都是一下培养20ml,这个会不会太多呢？
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5楼2015-07-31 10:52:17
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
dd812007135(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-02 22:21:07
试剂盒吸附柱的吸附能力一般是有限的，一般情况下浓度不会太高。当然你的60ng/ml的浓度的确太低了。。。
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
7楼2015-08-01 08:51:26
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wufeng1991

新虫 (小有名气)
是什么质粒呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2015-08-01 09:24:44
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fengjunchen

铜虫 (小有名气)
测了od600没？离心沉淀下来的的菌多不？怕是没摇起来……这浓度也太低了。

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2015-08-01 09:37:03
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tupo44

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定是高拷贝数质粒么，用的哪个菌克隆

[ 发自小木虫客户端 ]
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10楼2015-08-01 09:48:38
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